熊芮，范昌发，王佑春

中国食品药品检定研究院 实验动物资源研究所，北京 100050

随着现代组织学分析技术的发展，仅仅测量匀浆组织中分子的平均表达量已不能满足研究人员的需求，在保持细胞和组织结构特征的同时，得到检测目标详尽的空间分布信息以及精确可靠的定量结果在研究中变得越来越重要。使用传统方法，在福尔马林固定石蜡包埋组织切片上对多个目标信号共定位，在实验操作上十分具有挑战性。组织切片多光谱定量分析技术的高分辨率与高灵敏度，克服了传统分子成像技术的不足，为免疫细胞表型分析、定位和定量提供了新思路，被广泛用于肿瘤免疫学研究。

1 组织切片多光谱定量分析技术的原理

组织切片多光谱定量分析技术是近几年建立起来的一种新技术[1]，与流式细胞术类似，它能够定量评估细胞表型及活性，还可以同时提供组织背景和相关细胞与细胞相互作用的信息，而这些信息难以或不可能通过其他方法获得[2]，故该技术在生命科学、医学研究中有其独到用途。该技术包括三个部分：①多重免疫荧光标记，可通过独有的抗原直标和抗体去除技术，并借助酪酰胺信号放大（tyramide signal amplification，TSA）的作用[3]实现在同一切片上进行多重免疫荧光染色（标记原理如图1），在同一张完整的组织切片中同时清晰成像和进行数据分析的免疫荧光标记可多达7个。②多光谱成像（multispectral imaging，MSI）与光谱拆分算法（图2），组织自发荧光和相互重叠……