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基于环介导等温扩增技术对人乳头瘤病毒的分型检测

2018-08-29孙萌柴蕊张亚兰

生物技术通讯 2018年4期
关键词:检测

孙萌,柴蕊,张亚兰

北京城市学院 生物医药学部,北京 100083

宫颈癌是威胁妇女健康的主要疾病之一,被认为是全球性公共卫生问题,是发展中国家最常见的癌症,世界上每2 min就会有1个妇女死于宫颈癌[1]。而人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)持续感染是宫颈癌和一些生殖器瘤样病变的主要原因。HPV有多种基因型,目前已知100多种,其中30余种可从受感染的生殖道组织中分离出来[2-4]。根据病毒致癌性的大小,可将HPV分为低危型(非癌相关型,包括HPV6、11、42、43和一些新型HPV)和高危型(癌相关型,包括 HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68)[5-6]。近10年来我国宫颈癌的发病率稳步上升且趋于年轻化,故对宫颈癌及癌前病变的早期发现、早期诊断、早期干预显得非常必要。

发达国家宫颈癌的筛查流程多为HPV检测和细胞学检查同时进行,异常者转阴道镜检查,可疑病变定点活检,随访以HPV检测和细胞学检查为主[7-12]。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)是一种新型体外等温扩增特异性核酸片段的技术,该技术主要利用2对特殊引物和具有链置换活性的DNA聚合酶在一定条件下进行反应,只需把基因模板、引物,链置换DNA合成酶等共同置于一定温度(60~65℃)下,可在15 min至1.5 h内出现109~1010倍的扩增。LAMP技术针对HPV的DNA检测,具有较高的特异性,操作简单、快速高效。通过LAMP完成HPV分型是一种快速检测HPV亚型的方法,对宫颈癌及癌前病变筛查具有重大意义,可为临床宫颈病变的诊治提供依据。HPV高危型有多种,除HPV59、HPV66、HPV68这3种亚型,其他高危型已经可以通过LAMP检测出来。因此,我们选取高危型HPV59、HPV66、HPV68作为实验样本开展研究。……

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