刘潇，李文桂,罗广旭

重庆医科大学附属第一医院 传染病寄生虫病研究所，重庆 400016

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,Pa）是医院内感染的主要致病菌之一。Pa易定植且易耐药，可导致囊性纤维化或免疫力低下等患者发生难治性感染[1-2]。2014年全国医院感染横断面调查报告显示，下呼吸道感染所分离的病原体中Pa数量（1573/7477株）居首位[3]。2016年中国CHINET细菌耐药性监测结果显示，广泛耐药的Pa菌株检出率为2.1%，呈上升趋势[4]。若Pa感染未得到及时治疗或彻底治愈，转变为慢性感染，会使得治疗难度加大。疫苗的应用弥补了细菌的耐药性和抗菌药物长期大量使用产生的菌群失调等不足，为Pa的防治提供了新的思路[5]。

外膜蛋白Ⅰ（outer membrane proteinⅠ，OprⅠ）是一种结合在肽聚糖上的脂蛋白[6]，其脂质尾是其有效发挥多种类型免疫应答的重要成分之一[7-8]。Westritschnig 等[9-10]将 OprⅠ疫苗免疫健康志愿者，发现其可诱导血清特异性IgG抗体升高，提示OprⅠ是一种有希望的疫苗分子。我们拟将OprⅠ基因插入原核表达载体pGEX-1λT，构建pGEX-OprⅠ，再将其电穿孔转化大肠杆菌BL21（DE3），研究该重组质粒在大肠杆菌中的表达，为Pa疫苗研制提供有价值的材料。

1 材料与方法

1.1 材料

Pa的PA01株由重庆医科大学附属儿童医院余加林教授惠赠；pGEX-1λT和大肠杆菌BL21（DE3）由本室保存。

DNA抽提试剂盒、PCR扩增试剂盒、质粒抽提试剂盒、PCR产物纯化试剂盒购于上海生工公司；BamHⅠ和EcoRⅠ限制性内切酶、T4DNA连接酶购于Fermentas公司；HRP标记的羊抗鼠IgG购于北京鼎今生物科技公司；Pa感染的鼠血清、LB液体和固体培养基由本室保存。

恒温摇床购于日本三洋公司；高速离心机、电穿孔仪购于德国Eppendorf公司；……