李慧，王玮，丁红梅，董洁，黄皑雪，罗昭锋，李洁，白琛俊，李少华，邵宁生

1.军事科学院 军事医学研究院 军事认知与脑科学研究所，北京 100850；2.中国人民武装警察部队后勤学院 生物化学与分子生物学教研室，天津 300309；3.中国科学技术大学，安徽 合肥 230026

指数富集的配基系统进化（systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX）技术，是运用大容量的随机寡核苷酸文库，同时结合体外PCR扩增技术，以指数形式富集与靶分子特异结合的寡核苷酸适配体的高通量生物文库筛选技术[1-2]。自1990年以来，SELEX技术得到迅猛发展，已从筛选一些简单靶分子扩大到完整的细胞、病毒颗粒、细菌等复杂靶分子[3-6]。由寡核苷酸文库筛选获得的适配体具有更强的特异性和更高的亲和力，在医学基础研究、临床诊断及药物筛选等多方面得到广泛应用[7-8]。

人Vasorin（VASN）蛋白是一种典型的Ⅰ型膜蛋白，多肽链的N端在胞外，C端在胞内，含有串联的富含亮氨酸（LRR）结构域、表皮生长因子（EGF）样结构域和纤连蛋白Ⅲ（FN3）结构域，而其他含有这些结构域的细胞外基质蛋白和黏附分子通常都具有多个结合分子，通过多条通路发挥生物学功能[9]。VASN蛋白由673个氨基酸残基组成，预期相对分子量为74×103。我们通过构建VASN胞外区重组表达质粒，转化大肠杆菌，在IPTG诱导下获得了重组人VASN蛋白，经Ni2+柱纯化获得了纯度为90%的重组VASN蛋白胞外区（rhVASN）[10]。本研究以VASN蛋白作为靶分子，采用表面等离子共振（SPR）-SELEX技术筛选VASN蛋白的特异适配体，为今后开展VASN蛋白的检测和功能研究奠定基础。

1 材料和方法

1.1 材料

人肝癌细胞株HepG2、人正常肝细胞L02均为本室保存；……