袁向飞，田文聪，谢俊木子，王 丰

作为一种过继免疫疗法，CD19嵌合抗原受体T细胞 CAR-T (chimeric antigen receptor T cell,CAR-T）在治疗B淋巴细胞白血病方面取得了举世瞩目的成功，被认为是CAR-T治疗技术的里程碑；由此，CAR-T在治疗实体肿瘤领域中的应用也成为了新近的肿瘤免疫治疗研究的热点[1]。Katz等[2-4]利用以癌胚抗原为靶点的CAR-T（CEA CAR-T）开展了一系列针对结肠癌肝转移和腹膜转移的临床前研究工作，特别是对于肝转移的治疗已经进入临床Ⅰ期试验阶段；然而，他们也同时指出肿瘤固有的免疫抑制微环境是限制CAR-T疗效的重要原因之一。

实体肿瘤的免疫抑制微环境与其瘤内的低氧状态密切相关，许多研究业已证实：在低氧环境中，肿瘤细胞往往会上调诸多免疫抑制分子,比如程序性死亡受体-配体1(PD-L1)[5-6]、半乳糖凝集素-1(galectin-1)[7]、环氧合酶 -2（COX-2）[8]和血管内皮生长因子（VEGF）[9]等。而低氧诱导因子-1（HIF-1）作为低氧环境的重要响应元件，直接调控着上述免疫抑制分子的转录。

大黄酸又名1,8-二羟基-3-羧基蒽醌，是中药大黄的主要有效成分之一。在我们的前期研究工作中发现大黄酸能够下调胰腺癌细胞中HIF-1α（HIF-1的亚基）的水平，从而降低其下游分子的表达水平[10]。据此我们认为：在低氧环境下，大黄酸能够通过降低结肠癌中HIF-1α的水平致使其免疫抑制分子的表达下调，从而有助于效应T细胞对肿瘤细胞的杀伤。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 人结肠癌细胞系HT29和HCT116，以及人胚肾来源的细胞系293 T用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基培养。低氧条件培养在低氧罐进行，步骤如下[11-12]：用N2(95%) 和CO2(5%)的混合气体充满罐体，待罐内O2水平降为1%时，密封并置于37 ℃。……