李 晖 骆志国

肺癌是目前发病率和死亡率均居首位的恶性肿瘤，其中以非小细胞肺癌为多见，约占肺癌所有病例的80%～85%。由于肺癌具有很强的侵袭迁移能力，所以是恶性肿瘤较高的肿瘤之一，且具有多种多样的生物学特性[1-2]。现有大量的研究证实Caspase3是一切凋亡信号传导的共同通路，前期查阅大量文献未见有杜仲通过激活caspase3途径来诱导肿瘤细胞凋亡的相关报道[3-4]。此外，虽然有证据表明在非小细胞癌中Caspase3可通过切断PARP途径，裂解DNA引起细胞凋亡，对抗Surivin基因抑制凋亡作用从而诱导肿瘤细胞凋亡[5-7]，但国内外关于EPO通过激活caspase3途径抑制肺癌细胞侵袭的研究亦未见报道。本研究中一是研究杜仲总多糖(EOP)对Lewis肺癌小鼠LLC细胞体外生长的抑制作用：检测EOP、CDDP对LLC及KMB-17的细胞毒作用，证明其能否抑制肺癌细胞生长。二是探讨杜仲总多糖(EOP)抑制Lewis肺癌小鼠LLC细胞的可能作用机制：检测EOP、CDDP作用LLC细胞前后细胞中Caspase3 mRNA表达水平和蛋白表达水平的变化，证明其是否通过激活Caspase3 途径诱导肺癌细胞凋亡。

1 材料与方法

1.1 细胞株试剂与仪器

1.1.1 细胞株 小鼠Lewis肺腺癌LLC细胞株和人胚肺组织KMB-17二倍体细胞株购于西安交通大学。

1.1.2 主要试剂 caspase3 抗体(兔抗人多克隆抗体，NEB 原装)，pYSTAT3 抗体(兔抗人多克隆抗体，PharMigen 原装)，新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，RPMI-1640培养基(Gibco公司，货号：22400-071)，PBS(江苏恒瑞)。

1.1.3 主要实验仪器 流式细胞仪(美国BD公司)；CO2培养箱、漩涡振荡仪(美国Thermo公司)；高速低温离心机(德国Ependoff公司)；倒置光学显微镜(奥林巴斯)；酶标仪(北京伯辉生物科技有限公司)；……