李安荣 王静 王辉 张涛 周平 朱瑞娟

(湖北省十堰市太和医院/湖北医药学院附属医院: 1神经外科; 2病理科，湖北 十堰 442000)

脑胶质瘤是临床最常见的颅内恶性肿瘤，传统的脑胶质瘤治疗包括外科手术治疗、联合放疗和化疗的干预等，在治疗过程中，尽管积极采取联合治疗方案，但预后仍然相当差。脑胶质瘤的发生和发展涉及到许多癌基因的扩增、抑癌基因的失活以及一些重要的信号转导通路的异常，这些分子水平的改变直接影响到了肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭等一系列生物学行为[1]，因此，基因治疗作为脑胶质瘤治疗的一种新的分子工具，对于提高临床疗效具有是十分重要的意义，本文利用RNAi技术，在体外抑制胶质瘤细胞PDGF-B基因的表达,探讨胶质瘤RNAi治疗的新靶点。

材料与方法

一、材料及肿瘤细胞株

小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)双链由上海吉马生物技术工程公司合成，序列如下：正义链5'-CCACTCGATCCGCTCCTTTGA-3'；反义链5'-UUAGCCTGTTGAGAACCTGGC-3'；Trizol试剂(Invitrogen公司)； PCR引物由上海生物工程技术服务有限公司合成；DNA 回收纯化试剂盒购自Fermentas公司、十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)购自Sigma 公司；琼脂粉购自日本Agar公司；1640培养基(Hyclone公司)；特级胎牛血清(杭州四季青公司)；T4 DNA Ligase(Fermentas公司)；鼠抗人PDGF-B单克隆抗体，羊抗鼠二抗IgG(美国Santa Cruz公司)；琼脂糖(Invitrogen公司)；硝酸纤维素膜(购自晶美公司)；二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide, DMSO)(Sigma公司)；细胞基因组DNA提取试剂盒(美国AXYGEN公司)。人胶质瘤U251细胞株来自武汉大学科研中心保存，常规细胞培养和传代。实验分组：第1组为实验组，即转染siRNA的细胞组，第2组为阴性对照组，即转染空白质粒的细胞组；……