范学哲，王　静，张艳君， 张　业

(中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院, 北京 100005)

神经细胞形成是复杂的调控过程，在神经分化模型中研究其调控机制简化了神经分化调控网络的研究复杂度，atRA诱导P19细胞分化模型是目前研究神经分化的成熟模型之一[1-2]。组蛋白转录后修饰维持正常神经分化过程，研究组蛋白修饰是研究表观遗传在神经分化过程中的功能最主要的方式之一[3-4]。曲古抑菌素(trichostatin A,TSA)是特异的Ⅰ类和Ⅱ类组蛋白去乙酰化酶抑制剂[5]，但它无法抑制第Ⅲ类组蛋白的去乙酰化酶活性，烟酰胺(nicotinamide,NAM)可抑制Ⅲ类组蛋白去乙酰基酶活性[6]。腺苷二醛(adenosine dialdehyde,AdOx)是甲基转移酶抑制剂[7]。利用组蛋白修饰抑制剂研究组蛋白修饰对基因表达调控的影响已成为研究表观遗传机制的高效手段。LncRNA Neat1在神经兴奋中起重要作用，其表达量依赖于神经兴奋性[8]。但LncRNA Neat1在神经分化过程中的调节机制尚不清楚，本实验通过研究LncRNA Neat1表达量在atRA诱导P19分化的过程中变化，进而发现组蛋白修饰对于Neat1表达的影响。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1试剂：α-MEM(Gibco公司)；胎牛血清(中国医学科学院血液研究所)；Trizol(Invitrogen公司)；RNAVzol(Vigofect公司)；M-MLV反转录酶和RNase-free DNase Ⅰ(Promega公司)；SYBR Premix Ex Taq、Ribonuclease Inhibitor、dNTP(TaKaRa公司)。

1.1.2药物：全反式维全酸(atRA)、腺苷二醛(AdOx)、古柳抑菌素(TSA)、烟酰胺(NAM)(Sigma-Aldrich公司)。

1.1.3细胞：小鼠畸胎瘤细胞P19细胞系(中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心)。

1.2　方法

1.2.1P19细胞培养及atRA诱导分化:在含10%胎牛血清的α-MEM完全培养基，5% CO2、37 ℃条件下贴壁培养小鼠畸胎瘤细胞系P19，将培养的P19细胞用胰蛋白酶消化后，以1×105个/mL细胞接种于细胞培养皿中，24 h后，利用含终浓度0.5 μmol/L atRA的α-MEM培养基培养细胞。……