成丽琴，张祝琴，陈厚早

(中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 医学分子生物学国家重点实验室， 北京 100005)

肝细胞癌(以下简称肝癌)是全球最常见的恶性肿瘤，也是中国死亡率最高的癌[1]。目前中国肝癌的治疗首选手术切除，而不能手术的患者则以化疗为主[2]。皮下注射干扰素α(interferon α, IFNα)作为一种简单、方便、价格相对便宜的方法，对提高肝癌患者远期生存率有明显的效果[3-4]。

IFNα 是干扰素家族的I型IFN，因其抗肿瘤效应而被熟知。一方面，它可以直接抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡；另一方面，它可以通过促进抗肿瘤免疫反应发挥作用[5]。用IFN α处理6 h后，肝癌细胞系Huh7的cDNA基因表达谱芯片显示，胞苷单磷酸激酶2(cytidine/uridine monopho-sphate kinase 2, CMPK2)的转录水平显著上调[6]。CMPK2是位于线粒体的参与核苷酸补救途径的酶。据报道，CMPK2在巨噬细胞的激活中发挥重要作用[7]。本研究拟对CMPK2在IFNα治疗肝癌中的抗肿瘤免疫反应作用进行探讨。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1细胞系：人肝癌细胞系Huh7、人胚胎肾上皮细胞系293T和小鼠巨噬细胞系RAW264.7(本实验室保存)。

1.1.2主要试剂：DMEM培养基(中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心)；胎牛血清(Gibco公司); CMPK2质粒和抗体Anti-CMPK2 (Origene公司); Aldrich RNA提取裂解液Trizol(Invitrogen公司); 脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)和β-actin抗体(Sigma-Aldrich公司)；注射用重组人IFNα(天津未名生物医药有限公司); 反转录试剂盒(TaKaRa公司); 实时定量PCR(RT-qPCR)试剂盒(Vazyme公司); BCA蛋白定量试剂盒(赛默飞公司); 信号传导转录激活因子1(signal transducers and activators of transcription 1, STAT1)的抗体和P-STAT1抗体(Cell Signaling Technology公司); 细胞裂解液RIPA和蛋白上样缓冲液(上海碧云天生物技术有限公司); PVDF膜(Millipore公司)；……