胡芳 阔依旦·图亚 韦晓虹 刘雪婷 罗顺葵 孙辽中山大学附属第五医院内分泌与代谢病科（广东珠海 59000）；新疆自治区人民医院（乌鲁木齐80000）；深圳市第二人民医院（广东深圳58000）

甲状腺乳头状癌（papillarythyroid carcinoma，PTC）是我国增长速度最快的恶性肿瘤之一［1-2］。目前有关前列腺素受体及其下游信号分子在肿瘤发生发展中的研究得到医学领域的关注［3］。笔者前期研究发现：COX⁃2在人PTC组织中表达明显增加，其主要产物PGE2的合成也明显增加［4］，PGE2主要通过其EP受体发挥生物学作用。但目前EP受体在PTC中的表达鲜有报道。本研究通过分析癌旁正常甲状腺组织（adjacent normal tissues，ANT），结节性甲状腺组织（nodular goiter，NG），PTC组织EP受体及其下游信号分子的表达，初步探讨PGE2/EPs在PTC发病中的作用。

1 材料与方法

1.1 病例及标本 留取2013年8月至2014年2月中山大学附属第五医院普外科甲状腺结节全切或次全切除术后的新鲜甲状腺组织。从中选取经病理结果确认的甲状腺乳头状癌组织15例（PTC）及其癌旁甲状腺组织（ANT），结节性甲状腺肿组织15例（NG），用于RT⁃qPCR检测，全部病例术前均无化疗、放疗及免疫治疗史。同时收集患者术后的石蜡标本，切片厚度为5 μm，用于免疫组化。本实验研究经过中山大学附属第五医院医学伦理委员会同意审批。

1.2 主要试剂 RT⁃qPCR引物设计和合成（Invit⁃rogen，USA）；TRIzol RNA 提取试剂（Invitrogen，USA）；PrimeScript RT Reagent Kit Perfect Real Time试剂盒（TaKaRa，日本）；EP4受体多克隆抗体（Cayman，USA）；兔多克隆抗体 PKAα+β及Epac1（Abcam，USA）：兔多克隆抗体 Phospho⁃AMPKα（Cell Signaling，USA）。即用型高效免疫组化二抗试剂盒（Thermo Scientific，USA）。

1.3 RT⁃qPCR 新鲜甲状腺组织使用Trizol研磨，提取总RNA，逆转录为cDNA，引物序列见［4］。使用下列扩增条件：95℃预变性5 min，95℃变性5 s，60℃退火20 s，72℃延伸20 s，共循环40次，95℃反应5 s，65℃反应1 min。……