方盛华 柳子川 邓旭斌

广州医科大学附属肿瘤医院1内一科，2内二科（广州510095）

口腔癌是发生在口腔的恶性肿瘤的总称，它是头颈部较常见的恶性肿瘤之一［1］。口腔癌主要起源于口腔上皮细胞的恶性病变，约80%属于鳞状上皮细胞癌［2］。口腔癌发病隐蔽，早期缺乏特异性的临床表现。大部分患者确诊口腔癌时，多为疾病的中晚期状态。因此，发掘可早期诊断口腔癌的分子标记物，并发现口腔癌新的治疗靶标，为临床亟待解决的问题。癌基因的激活通常导致口腔癌的发生、进展以及远处转移。针对癌基因的特异性治疗，可能为口腔癌的治疗开发新靶点打下初步的理论基础［3］。

HOXA3是近来发现的一个促癌基因。研究发现：HOXA3可以促进细胞生长，以及肿瘤细胞的侵袭以及转移［4］。关于HOXA3在肿瘤中的研究目前较少，在口腔癌中尚未见相关报道。本研究拟探讨HOXA3在口腔癌中的表达情况，并敲除HOXA3表达，在细胞功能以及机制上研究HOXA3对口腔癌细胞生长及侵袭能力的影响。

本研究明确HOXA3基因在口腔癌中的表达情况，以及致病作用，为口腔癌的治疗开发新靶点。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 口腔癌细胞购自上海中科院。细胞使用PRMI⁃1640（含10%胎牛血清），放置于含5%CO2的37℃的培养箱中培养。

1.2 实时荧光定量PCR（qRT⁃PCR），蛋白质印迹法（Western Blot）试验 使用TRIzol试剂（Invitrogen公司）提取口腔癌细胞RNA。实时荧光定量PCR的试剂盒（qSYBR⁃green⁃containing PCR kit）购自Takara。

使用Lysis buffer提取细胞蛋白质，95℃水浴锅使蛋白质变性。使用蛋白质印迹法检测相关蛋白在细胞中的表达水平。cyclinD1，c⁃myc，CDK4以及GAPDH抗体购自santa cruz公司。……