李林株 郭灵敏 杜佩铭 黄尚书

广东省佛山市高明区人民医院（广东佛山 528500）

肝细胞性肝癌（简称肝癌）在世界上肿瘤发病率中排名第五［1］，每年新发病例约100万，也是我国常见的恶性程度最高的肿瘤之一［2］。肝癌的预后不良主要是因为缺乏有效的治疗方法以及进行根治性切除后仍然有较高的复发率［3-5］。目前肝癌的具体发病机制仍不明确。因此，对肝癌发病因素的深入探索和新的治疗方法的研究具有重要意义。

FUCA1是糖基水解酶29蛋白家族中的一员［6］，它参与糖蛋白、糖脂等生物活性的大分子的分解代谢反应，并广泛分布于人体的组织细胞、血液和体液中［7］。已有研究表明FUCA1的突变会导致代谢异常进而引起岩藻糖苷贮积症，但其与癌症的关系还不是很明确［8-10］。本研究选择可手术肝癌患者为研究对象，探讨FUCA1的表达与临床病理参数及预后的关系，考察其作为临床侵袭及预后的预测指标的可能性。

1 对象与方法

1.1 研究对象 所有标本均为广东省佛山市高明区人民医院普通外科2011年7月至2016年12月具有完整随访资料的原发性肝细胞肝癌患者72例。所有患者均知情同意，开展实验已获得伦理委员会批准。

1.2 主要试剂和仪器 总RNA提取试剂盒（OME⁃GA，美国）；qRT⁃PCR反转录试剂盒（RR047A，Ta⁃KaRa，大连）；SYBR®Premix Ex TaqTMⅡ试剂盒（RR820A，TaKaRa，大连）；FUCA1抗体和GAPDH抗体（Abcam，美国）。

1.3 Western blot检测FUCA1蛋白表达 通过蛋白裂解法收集肝癌组织和癌旁组织蛋白，使用BCA法确保各孔上样量相等，进行垂直电泳，转膜，TBS漂洗，封闭液封闭2 h。加入稀释的兔抗人FUCA1和GAPDH单克隆抗体，4℃孵育过夜，TBST洗涤后加入二抗，在室温下1 h后，再TBST洗涤，暗室内发光显影。……