李 蓉，乔 慧，王晓辉，张庆芳，迟乃玉*

（1.大连大学 生命科学与技术学院，辽宁 大连 116622；2.辽宁省海洋微生物工程技术研究中心，辽宁 大连 116622）

葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GOD）EC1.1.3.4是一类同源二聚体糖蛋白酶，能够以分子氧为电子受体，高效催化葡萄糖转化为葡萄糖酸并产生过氧化氢[1-2]。GOD具有分解葡萄糖、除氧、抑菌、保鲜等[3]作用，被广泛用于葡萄糖传感器、食品、生物燃料电池、饲料添加剂等[4-7]领域。

GOD普遍存在微生物与昆虫体内，前者因代谢优势成为研究重点。现有生产GOD野生菌株的研究集中于黑曲霉（Aspergillus niger）和青霉属（Penicilliumsp.）的少数种类[8]。前者合成胞内酶，后者可分泌胞外酶，同时青霉属分泌的酶催化能力更强[9-10]。目前菌株GOD酶活普遍较低[11-12]，市场价格昂贵，同时商品化的GOD基本为中高温酶[13]，低温（0～20℃）条件下催化效率低。这些不足限制了其在水产养殖、食品低温保鲜等领域的应用。海洋环境常年低温、寡营养的特点，孕育的微生物只需较低营养水平即可存活，并且通常会合成低温酶[14]。因此，本研究以黄海、渤海海泥为样品来源，筛选高产低温GOD菌株，对其进行形态学与分子生物学鉴定，并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）和酶谱分析，对所产GOD分子质量和酶学性质进行初步研究，以期为低温GOD的开发与应用提供一定基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 样品来源

海泥样品：采自大连黄海、渤海海域。

1.1.2 培养基

富集培养基：马铃薯200 g/L，葡萄糖20 g/L，渤海海水1 L，pH自然。121℃灭菌20 min。

种子培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，渤海海水1 L，pH自然。121℃灭菌20 min。……