刘 玲，杜海虹，范凌晔，聂 丹，毛熙光△

(1.西南医科大学附属医院妇产科，四川泸州 646000；2.四川省眉山市人民医院产科 620010)

宫颈癌是全球排名第3的妇女恶性肿瘤[1]，人乳头瘤病毒(HPV)感染宫颈后，病毒基因整合到人宫颈上皮细胞，与其他促癌因素共同作用促成癌症的发生。E7基因是HPV的主要致癌基因之一，其编码的E7蛋白可使细胞周期失控而发生永生化。人多梳蛋白2 (HPC2)即染色盒同源物4(chrombox homolog 4,CBX4)，在肿瘤细胞株和组织中表达上调，CBX4过表达与肿瘤分期和恶性程度密切相关[2]，HPC2对靶基因的抑制作用的异常可能导致宫颈癌的发生[3]。为探索HPC2与宫颈癌发生的机制，本课题组研究了HPC2与HPV16的原癌基因E7之间的关系及其对细胞增殖、凋亡的作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1细胞与试剂 siha细胞(由西南医科大学附属医院中心实验室惠赠)；Trizol、RNA提取试剂盒和cDNA试剂盒(北京天根生物科技有限公司)，HPC2 siRNA(广州锐博生物科技有限公司)，HPV16E7 siRNA(上海吉玛制药技术有限公司)，lipofectamine 2000 reagent(美国Invitrogen公司)，CBX4兔抗单克隆抗体(英国Abcam公司)，β-actin兔抗单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，CCK-8试剂盒(日本同仁公司)，膜联蛋白V标记的异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)细胞凋亡检测试剂盒(美国Thermo Fisher公司)。

1.2方法

1.2.1实验分组 将siha细胞分为4个组：空白对照组、NControl siRNA组(对照组)、HPC2 siRNA组和HPV16E7 siRNA组。空白对照组为未转染任何序列RNA组，NControl siRNA组为转染阴性序列对照组，HPC2 siRNA组为沉默HPC2组，HPV16E7 siRNA组为沉默HPV16E7组。

1.2.2细胞转染 每个6孔培养板中接种4×105个对数生长期的siha细胞，培养24 h，细胞融合达到60%时开始实验。操作步骤按照美国Invitrogen公司提供的操作说明。倒置荧光显微镜下观察转染24 h后NControl siRNA-CY3转染组红色荧光情况。……