张文俊 熊梅娟 刘怡果 薛国勇 刘曾旭△

(1 南昌大学解剖学教研室， 南昌 330000； 2 井冈山大学解剖学教研室， 吉安 343000)

神经损伤引起的疼痛机制复杂，未能完全闸明。嘌呤受体P2X家族在神经损伤引起的疼痛中发挥着重要的作用[1]。研究表明嘌呤P2X3受体表达水平与神经病理性疼痛呈正相关[2-3]。目前，用细胞移植治疗周围神经损伤效果较好，而嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells， OECs)是一种特殊的神经胶质细胞，能终生不断更新存活，释放多种神经营养因子，改变神经周边的损伤局部环境，利于神经修复[4-5]。微囊化(microencapsulation,MC)具有隔离移植细胞与宿主直接接触，免受宿主免疫排斥作用[6]，延长细胞存活时间，更有利于细胞修复神经损伤[7-8]。而微囊化嗅鞘细胞移植治疗神经损伤，国内外报道较少。本研究通过结扎SD大鼠的坐骨神经，制作周围神经损伤的动物模型，用微囊化嗅鞘细胞和非微囊化嗅鞘细胞移植到坐骨神经损伤周围，于术后10d和20d 用行为学方法检测各组大鼠机械刺激缩足反射阈值，原位杂交组织化学方法检测大鼠P2X3受体的表达情况并进行对比。

1 材料和方法

1.1 实验动物及主要材料

健康SD大鼠40只，雌雄不拘，体质量80～100g，周龄3周。

4%多聚甲醛，1%DEPC水(中国博士德公司)；15%胎牛血清(Transgen，北京)；DMEM/F12培养基(博士德，武汉)；1.5%海藻酸钠(美国Sigma公司)；专用PBS缓冲液(1000ml双蒸水、NaCl 30g、Na2HPO4·12H2O 6g、NaH2PO4·2H2O 0.4g，pH 7.2～7.6)，3%柠檬酸，2×SSC缓冲液(1000ml双蒸水加氯化钠17.6g、柠檬酸三钠8.8g)，0.5×SSC(300ml双蒸水+100ml 2×SSC)，0.2×SSC(270ml双蒸水+30ml 2×SSC)，P2X3受体专用原位杂交试剂盒(中国武汉博士德生物公司)包括：10×胃蛋白酶、预杂交液2ml、P2X3寡核苷酸探针杂交液2ml、封闭液5ml、生物素化鼠抗地高辛5ml、SABC-POD 5ml、生物素化过氧化物酶5ml。……