祁存芳，闫 帅，何 敏，刘 芳，唐延军，黄明玉

(1.青海大学医学院基础医学部，基础医学实验中心，青海 西宁 810001；2.解放军第四医院内科，青海 西宁 810007)

大量实验研究发现，成体哺乳动物脑内存在神经干细胞(neural stem and cells，NSCs)巢，NSCs在嗅球、皮层、室管膜区或室管膜下区(subventricular zone，SVZ)、纹状体(striatum)、齿状回(dentate gyrus，DG)颗粒细胞下区(Subgranular zone，SGZ)等组织中存在，NSCs具有自我增殖和潜在分化的能力。正常生理情况下，SVZ和SGZ仅有少量神经发生，以补偿生理的损失量。但在某些病理条件如脑缺血的情况下，SVZ和SGZ的NSCs被激活，促进其自我增殖，并分化为神经元整合到神经元网络，发挥自我修复作用。高海拔环境是一个相对缺氧的环境，目前对急性高原缺氧导致的海马颗粒细胞变性坏死或凋亡的研究有许多报道，但急性高原缺氧刺激对海马齿状回NSCs影响的研究报道很少，且结论不一。本研究采用低压氧舱模拟海拔5 000米高原环境，观察大鼠初次从海拔400米急进5 000米环境持续滞留3天，返回到海拔2 200米环境后，观察急性低压缺氧刺激对大鼠海马齿状回颗粒下区神经干细胞增殖和分化的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物

SD雄性大鼠120只，体重约280～310 g，由西安交通大学医学实验动物中心提供，清洁级，动物合格证号No. 22-9601018。

1.1.2 试剂

5-溴脱氧尿核苷(5-bromodeoxyuridine，BrdU)购于Sigma公司，抗BrdU小鼠单克隆抗体购于CST公司，抗双皮质素(Doublecortin，DCX)兔单克隆抗体购于Abcam公司，抗胶质纤维酸性蛋白(Glial FibrillaryAcidic Protein，GFAP)兔多克隆抗体购于Thermo公司，SABC试剂盒购于武汉博士德公司，生物素标记羊抗鼠/兔IG、FITC/Cy3标记荧光二抗购于北京康为公司。

1.2 方法

1.2.1 高原缺氧损伤模型的建立和组织取材