王 荣 覃海媚 杨凤莲 韦叶生 王俊利

(右江民族医学院,1 附属医院,2 检验科,3 生殖遗传实验室,百色 533000)

在2000年,Chen等[1]首次分析从牛的脊髓中获得的NI250同源物,继而克隆出了神经突起生长抑制因子(neurite growth inhibitor,Nogo)基因。Nogo属于网状蛋白(reticulon protein,RTN)家族的第4 成员,即RTN4。Nogo基因受不同的转录方式可翻译成3种蛋白异构体,包括Nogo-A、Nogo-B及Nogo-C。研究显示Nogo基因多态性和多种肿瘤等疾病密切相关。关于Nogo基因rs2968795G/A位点和rs10496040A/C位点遗传多态性的研究,尚未见报道。但是,不同遗传背景的人群对疾病的易感性表现不同。故本研究建立SNaPshot法和DNA测序技术检测这两个位点的基因型,并分析其多态性在不同人群中的差异。这不仅能丰富人类Nogo基因rs2968795G/A和rs10496040A/C的遗传多态性资料,也可为深入探讨同一疾病在不同人群中的易感性差异提供基础数据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取本院体检中心323例无血缘关系的体检者,包括181例男性与142例女性,年龄17～76岁。临床检查及实验室指标均在正常范围内。所有的研究对象均来自广西地区。研究方案在本院伦理委员会批准后进行,研究对象均签署知情同意书。

1.2 样本DNA制备

用EDTA-K2抗凝采血管采集上述研究对象的静脉血3ml,在4℃条件保存。采集标本48h内,取200μl标本按照血液基因组DNA提取试剂盒(北京天根生物科技公司)进行DNA提取,-20℃保存待用。

1.3 引物合成

参考NCBI数据库中Nogo基因rs2968795G/A和rs10496040A/C的碱基序列,运用Primer 3.0在线引物设计软件(http：//primer3.ut.ee/)设计所需特异性引物,由上海生工公司合成。rs2968795G/A位点的上游引物：5-CAGTCTGGTGGCAGAGTATGCTAAA GA-3,下游引物：5-GACAGGATTGTGCTCTCTCAC ACAA-3,延伸引物：5-CAGTCTGGTGGCAGAGTA TGCTAAAGA-3;rs10496040A/C位点上游引物：5-TGCATATCAC AGAGCAAATTCATACCA-3,下游引物：5-AGTGAATACAGTGTACCTTTTGAGA GC-3,延伸引物：5-AGTGAATACAGTGTACCTTT TGAGAGC-3。……