毛 鑫，阮俊杰，王 熠，操文浩，万 军

西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都 611756

半夏曲是由清半夏、白矾、六神曲、生姜汁、面粉等原料经发酵等工艺制成。具有降逆止呕，止咳化痰的功效，临床用于恶心呕吐，食欲不振，咳嗽痰壅［1］。现代研究显示半夏曲中含琥珀酸、生物碱等多种活性成分［2］，但目前尚无半夏曲中含量指标的控制方法。本实验依据半夏曲的研究现状以及琥珀酸、生物碱的化学性质［3］，分别采用电位滴定法和紫外分光光度法分别对半夏曲中琥珀酸、总生物碱进行测定，并开展方法学研究。

1 试药与仪器

1.1 试药 试药：半夏曲，四川弘升药业有限公司2批，生产日期：2015年11月，2016年5月；内江良辉药业有限公司1批，生产日期：2016年3月；四川千方中药股份有限公司1批，生产日期：2016年9月。依次编号为1～4号。方法学考察采用2号样品。对照品：琥珀酸对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-16030502)。盐酸麻黄碱对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110821-201112)。

1.2 仪器 BS110S电子天平(德国赛多利斯公司)；HX-200型高速中药粉碎机(浙江省永康市溪岸五金药具厂)；TU-1901双光束紫外可见光分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；DZ-2型自动电位滴定仪(上海仪电科学仪器股份有限公司)。

2 方法与结果

2.1 琥珀酸的测定［4-6］

2.1.1 标准 NaOH滴定液的配制 参照《中国药典》2015版第三部［7］进行配置标定，所制NaOH标准溶液的准确浓度为0.101 9 mol/L。

2.1.2 标准HCl滴定液的配制 参照《中国药典》2015版第三部进行配置标定，所制HCl标准溶液的准确浓度为0.107 9 mol/L。

2.1.3 琥珀酸对照品溶液的配制 精密称取18mg琥珀酸对照品，精密加入NaOH滴定液10 mL，超声处理(功率500 W，频率40 kHz)30分钟，转移至50 mL量瓶中，加新煮沸过的冷蒸馏水定容，摇匀，制成0.36 mg/mL的琥珀酸对照品溶液。

2.1.4 供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约5 g，精密称定，置锥形瓶中，加95%乙醇50 mL，加热回流1小时，同上操作，再重复提取2次，放冷，滤过，合并滤液，蒸干，残渣精密加入氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)10 mL，超声处理(功率500 W，频率40 kHz)30分钟，转移至50 mL量瓶中，加新沸过的冷蒸馏水至刻度，摇匀，即得。

2.1.5 空白溶液的制备 乙醇150 mL置水浴锅上蒸干，按“2.1.4”项方法中从“精密加入氢氧化钠滴定液”开始配制空白溶液。

2.1.6 琥珀酸对照品溶液的电位突跃范围测定 精密吸取浓度0.36 mg/mL的琥珀酸对照品溶液25 mL，置小烧杯中，将烧杯置电磁搅拌器的磁盘上，浸入电极，以浓度为0.094 32 mol/L的标准HCl溶液滴定，分阶段记录电位。记录消耗酸溶液的体积和电位值，以电位的变化量(ΔE)和体积的变化量(ΔV)的比值为纵坐标，电位变化前后所用HCl溶液体积的平均值(V)为横坐标作图，绘制ΔE/ΔV～V电位曲线图。见图1。

2.1.7 供试品电位突跃范围测定 精密量取25mL，照电位滴定法测定，用盐酸滴定液(0.1 mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白实验校正。滴定终点明显，滴定曲线见图2—3。

图1 琥珀酸对照品滴定曲线

图2 半夏曲样品中琥珀酸滴定曲线

图3 空白试验的滴定曲线

2.1.8 线性范围的考察 精密称取琥珀酸对照品30.0 mg，置50 mL容量瓶中，加 95%乙醇制成0.6 mg/mL琥珀酸对照品溶液。分别精密吸取3 mL、5 mL、7 mL、9 mL、11 mL、13 mL 的琥珀酸对照品溶液，按供试品溶液的制备方法制备。精密量取25 mL，照电位滴定法测定，以相应的试剂同法制作空白，对滴定结果校正。以琥珀酸含量为横坐标，消耗的NaOH体积为纵坐标。每1 mL氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)相当于5.904 mg的琥珀酸(C4H6O4)。结果显示琥珀酸在1.8～7.8 mg/mL的范围内线性关系良好，琥珀酸回归方程：Y=0.169 5X+0.005 2，r=0.999 2。

2.1.9 精密度实验 精密吸取同一批次供试品溶液5份，按“2.1.7”项方法测定，空白校正。计算得RSD=1.71%，表明仪器精密度良好。

2.1.10 稳定性实验 分别于 0、1、2、4、6、8 小时从同一供试品溶液中吸取25 mL并按法测定。计算得RSD=2.05%，表明供试品溶液在8小时内稳定。

2.1.11 重复性实验 称取同一批次半夏样品粉末5份，每份约5 g，精密称定，按“2.1.4”项方法提取，测定，用空白校正后，计算得样品中平均含量为4.05 mg/g，且RSD=2.04%，表明该测定方法重复性良好。

2.1.12 加样回收实验 精密称取6份已知总酸含量的样品2.5 g，取琥珀酸对照品10 g，精密称定，按确定的方法提取，测定，并用空白进行校正。计算回收率为100.19%，RSD=2.26%(n=6)。见表1。

表1 琥珀酸加样回收实验

2.2 总生物碱的测定［8］

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱对照品10.0 mg，置5 mL容量瓶中，加蒸馏水制成每l mL含0.2 mg盐酸麻黄碱溶液，即得对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取半夏曲样品粉末1.5 g，置50 mL三角瓶中，加浓氨水1 mL，湿润后，加三氯甲烷10 mL，称定质量。冷浸3小时后分别超声提取60分钟，加三氯甲烷补足减失的质量，过滤，残渣以10 mL三氯甲烷分3次洗涤，合并滤液与洗液，60℃以下加热蒸发至三氯甲烷蒸干。加入8 mL三氯甲烷使溶解并转移至25 mL分液漏斗中，再依次精密加入10 mL柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH=5.6)和1 mL0.1%溴麝香草酚蓝溶液，充分振摇后，静置15分钟，取三氯甲烷层，水层再用三氯甲烷同法萃取两次，每次8 mL。合并三氯甲烷层，用三氯甲烷定容于25 mL容量瓶内，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 精密称取不含清半夏的样品粉末1.5 g，置50 mL三角瓶中，按“2.2.2”项同法制备阴性对照溶液。

2.2.4 最大吸收波长的确定 按供试品溶液的制备方法，不称取半夏曲样品粉末制备空白对照液。将对照品溶液、供试液、阴性对照液和空白对照液在280～800 nm波长范围内进行全波长光谱扫描。结果半夏曲样品供试液和对照品溶液在416 nm处都有最大吸收，而空白对照液及阴性对照溶液无干扰。故本含量测定最终确定416 nm波长作为半夏曲盐酸麻黄碱含量的测定波长。

2.2.5 标准曲线的制备 分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 的盐酸麻黄碱对照品溶液(C=0.208 0 mg/mL)至分液漏斗中，按供试品溶液制备方法进行制备，得各浓度的盐酸麻黄碱溶液，以相应的试剂同法制作空白。照紫外分光光度法，在416 nm波长处测定吸光度，以吸光度A为纵坐标，对照品浓度C为横坐标，绘制标准曲线。结果回归方程Y=18.58X+0.002，r=0.999 1。表明盐酸麻黄碱在0.008 2～0.041 0 mg/mL的范围内线性关系良好。

2.2.6 精密度实验 取供试品溶液，在416 nm波长处重复测定5次。计算得RSD=2.28%，表明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性实验 取供试品溶液，在416 nm波长处测定其吸收度，并每隔30分钟测定一次，连续测定7次。计算得RSD=2.84%，表明供试品溶液在180 min内测定稳定。

2.2.8 重复性实验 按“2.2.2”项同法平行制备5份供试品溶液，分别在416 nm处测定其吸收度。计算得样品平均含量为0.181 mg/g，RSD=1.93%，表明该测定方法重复性良好。

2.2.9 加样回收实验 取半夏曲样品粉末0.7 g，5份，精密称定，精密加入盐酸麻黄碱对照品溶液(C＝0.208 0 mg/mL)0.8 mL，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在416 nm处测定其吸收度。计算得平均回收率为99.71%，RSD为2.38%(n=6)。见表2。

表2 总生物碱的加样回收实验

3 样品测定

精密称取不同批次供试品，按确定的方法分别进行琥珀酸的含量测定和总生物碱的测定，每个样品平行测定2次，取平均值，结果见表3。

表3 不同半夏曲样品含量测定

4 讨论

4.1 指标成分的选择 半夏中的琥珀酸是其发挥止咳，祛痰，抗炎的主要成分。此外，半夏中所含的生物碱有降压、降脂作用,对体外肿瘤细胞的增殖，也具有较强的抑制作用，抑瘤及镇咳作用。因此，选择琥珀酸和总生物碱作为其质量控制的指标性成分。

4.2 半夏曲质量标准 现有半夏曲的质量标准主要收载于中药部颁标准，但其中均无含量测定控制指标。本实验对半夏曲琥珀酸及总生物碱均进行了含量测定，为更好控制半夏曲质量提供实验依据。

4.3 含量测定 在琥珀酸的测定中，滴定曲线有波动现象，可能是由于自动滴定速度过快，在仪器记录数据的时间间隔内，酸碱未反应完全或者反应完全后未搅拌均匀。控制滴定速度后，波动现象消失。总生物碱的测定采用的是酸性染料比色法，实验中应严格控制溶液的pH值，pH过高或过低都会导致生物碱无法与酸性染料结合成有色化合物，从而无法溶于有机化合物，影响测定结果。

参考文献

［1］赵高潮，刘继宁.半夏的炮制及临床应用浅析［J］.陕西中医，2009，30(5):601-602.

［2］张超，赵重博，胥敏，等.半夏曲炮制历史沿革及现代研究［J］.世界科学技术:中医药现代化，2015，17(9):1893-1898.

［3］董雪，王延年.试论半夏曲古今研究概况［C］.北京：中华中医药学会中药炮制分会2009年学术研讨会，2009.

［4］李军鸽，朱凯，于智莘，等.pH电位滴定法测定清半夏中琥珀酸的含量［J］.中国科技纵横，2015，21(5):212.

［5］王兵，李敏，卢道会，等.电位滴定法测定不同居群半夏中总酸的含量［J］.中药与临床，2010，1(2):15-17.

［6］张慧慧，黄永亮，吴纯洁，等.电位滴定法测定半夏硫熏前后琥珀酸的含量变化［J］.临床合理用药杂志，2015，8(5):95-96.

［7］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：中国医药科技出版社，2015：2011.

［8］邬浩杰.半夏总生物碱的含量测定［J］.海峡药学，2010，22(3):69-70.