李 超， 刘 敏， 刘志华

(中山大学附属第六医院结直肠外科， 广东省胃肠病学研究所， 广东 广州 510655)

目前肠屏障功能调节的研究主要集中在益生菌及其活性成分、致病菌及相关成分和炎症介质等方面[1-2]，对于其机制的研究仍有一定的局限[3]。微小RNA(microRNA，miRNA，miR)近几年的研究主要集中在肿瘤[4-6]、心血管疾病[7]以及神经系统疾病[8]等，而其对肠屏障功能的影响研究较少[9]。研究表明，miR-21可激活肠上皮细胞内的丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)信号通路，抑制第10号染色体缺失的磷酸酶-张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10，PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)信号通路，且PTEN/PI3K信号通路活化被认为参与了肠上皮机械屏障的调节[10]。miR-21是否通过其它途径影响肠上皮机械屏障仍不明确。生物信息学分析表明，miR-21的预测靶基因包括Rho蛋白家族中的一些成员，如ROCK1。有研究表明，Rho蛋白家族中ROCK1参与调节紧密连接(tight junction，TJ)相关蛋白——闭合蛋白(occludin)的表达与沉积[11]。肠上皮机械屏障主要包括肠上皮细胞及细胞间紧密连接蛋白，occludin是重要的细胞间紧密连接蛋白。据此，我们假设miR-21可能通过靶向调控ROCK1而调节肠屏障功能相关蛋白occludin。在此基础上，我们拟通过细胞水平上调或下调miR-21观察肠上皮细胞的功能表型改变，进而采用生物信息学方法预测miR-21的靶基因，并通过萤光素酶报告基因进行验证。从而明确miR-21对肠屏障功能的影响，推测可能的机制。

材 料 和 方 法

1 细胞

人正常结肠上皮细胞系NCM460购于INCELL；人胚肾细胞株293T由中山大学附属第六医院胃肠病研究所提供。……