季春华　刘　辉　向　明

(复旦大学附属上海市第五人民医院胸外科　上海　200240)

目前肺癌的发病率及死亡率居所有恶性肿瘤之首。而且近些年来肺癌,尤其是晚期肺癌治疗后的5年生存率提高并不大,分子靶向药物在肺癌治疗中的地位逐年提高,因此,新的分子靶向基因及药物的研究十分必要。FHL1(four and a half LIM domain protein 1)是近年来研究发现的一种肿瘤抑制因子,表达于人体的多种正常细胞以及肿瘤细胞中[1]。FHL1在多种实体肿瘤细胞中呈低表达,而且其表达水平与肿瘤的进展呈负相关[2]。我们通过在体外细胞实验中改变FHL1在肺腺癌细胞株中的表达,研究其对肺腺癌细胞株生物学特性的影响,为进一步的实验研究提供基础,以期将来能为肺腺癌的诊断治疗提供新的思路。

材 料 和 方 法

材料和试剂本实验所用肺腺癌细胞株A549、人源FHL1-mRNA慢病毒及人源FHL1 shRNA慢病毒套装购自上海匠莱生物科技有限公司;FHL1抗体购自美国Abcam公司(批号ab58067);CCK8试剂盒、Takara逆转录试剂盒、SYBR Green Master Mixes 试剂盒、Transwell小室等实验试剂器材均购自上海丰能医药科技有限公司。

实验方法

FHL1在非小细胞肺癌中的本底表达选取A549细胞进行实验,检测FHL1基因在mRNA水平上的表达情况,即本底表达水平。接种细胞,取对数期A549细胞,用含10%胎牛血清的DMEM培养基配成单细胞悬液,计数,接种至6孔板中,于37 ℃,5% CO2细胞培养箱中预培养24 h。

收集细胞,使用Trizol/三氯甲烷/异丙醇法提取细胞总RNA,定量,将RNA逆转录成cDNA,以U6 为内参,以cDNA 为模板进行RT-PCR扩增FHL1。由PCR 反应曲线得到的Ct 值计算,按公式2-△△Ct计算细胞株中FHL1 mRNA 相对表达量。……