刘少鹏， 张 琪， 张红梅， 杨光华， 张国志， 王长友

结肠癌是常见的肠道恶性肿瘤，流行病学调查显示，每年全球新诊断结肠癌的患者为120万人，死亡人数超过60万[1]。2型糖尿病作为结肠癌发病的因素，已得到广泛认可[2]。Evans等首先发现，二甲双胍可降低2型糖尿病患者罹患多种恶性肿瘤的机率[3]。二甲双胍对结肠癌癌细胞等具有抑制增殖、促进凋亡的作用[4]。磷酸酰肌醇3-激酶/蛋白酶B/激酶-3(PI3K/AKT/GSK-3β)信号通路在多种肿瘤细胞中呈高表达，该通路的激活，使磷酸化AKT(P-AKT)过度表达后作用于下游靶因子GSK-3β，对于乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肾远端小管肿瘤细胞具有促进增殖、分化及抑制凋亡等作用[5-9]。二甲双胍对结肠癌细胞是否也是经过该通路发挥抗癌作用呢？本实验以Western-blot检测PI3K/AKT/GSK-3β通路相关蛋白的表达量变化，初步探讨二甲双胍抑制人结肠癌细胞的可能机制，报道如下。

1 材料与方法

1.1主要材料及仪器 人结肠癌HT29细胞(华北理工大学实验中心细胞库)；二甲双胍(美国Sigma公司)；RPMI 1640培养基(美国Gibco公司)；四季青胎牛血清(浙江天杭生物公司)；胰酶(美国Hyclone公司)；MTT细胞增殖及毒性检测试剂盒(上海碧云天生物技术研究所)。光镜及倒置荧光显微镜(日本Olympus公司)；二氧化碳细胞培养箱(ECO2150型，美国New brunswick scientific)；流式细胞仪(美国BD公司)；酶标仪(上海Bio-Rad公司);BCA蛋白浓度检测试剂盒，兔抗人PI3K，AKT，P-AKT，GSK-3β,P-GSK-3β抗体及HR标记羊抗鼠二抗，HR标记羊抗兔二抗(上海碧云天生物技术研究所)。

1.2方法

1.2.1细胞培养 培养环境：37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱。培养基：含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基。培养方式：隔天更换新鲜培养基，观察、收集对数期生长的HT29细胞。……