蒋昌毅，柯昌兴，叶枝能，黄 津，龚年东，王海峰

(1.昆明医科大学第二附属医院泌尿外科,云南昆明 650101；2.普洱市中心医院泌尿外科,云南普洱 665000)

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年上升趋势[1]，男性的发病率高于女性[2]。近年来，随着基因治疗在临床中的开展，寻找膀胱癌的分子靶点对临床的治疗、预后具有十分重要的意义。微小核糖核酸(microRNAs，miRNAs)在真核细胞中广泛存在，调控着细胞的生物学功能[3]。文献报道，miRNAs 调节近30%的人类基因组蛋白编码基因[4]，可负性调控靶基因使基因的转录水平下降。miR-3622a具有与miRNAs类似的特性，在相应的疾病进程中起到一定的调控作用[5]。人源性长寿保障基因2(homo sapiens longevity assurance homologue2，LASS2)，也被命名为肿瘤转移抑制因子，目前已被证实LASS2在前列腺癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌等多种肿瘤中发挥着抑癌基因的作用[6]。在本研究中，我们构建miR-3622a mimic表达载体，并转染膀胱癌细胞EJ、BIU、RT4，探讨miR-3622a通过LASS2调控对膀胱癌细胞增值、迁移能力的影响，为膀胱癌远期的基因治疗提供理论基础。

1 材料与方法

1.1材料膀胱癌细胞株EJ、BIU、RT4(昆医附二院中心实验室)、RPMI(美国Hyclone公司)、胎牛血清购(南美乌拉圭CELL-BOX公司)、Trizol(日本TaKaRa公司)、FastKing cDNA第一链合成试剂盒、Talent荧光定量检测试剂盒(中国北京天根生化公司)；引物(昆明硕擎公司)、LASS2一抗和Beta-Actin一抗和羊抗兔二抗HRP标记(美国Millipore公司)、CCK-8(中国汉恒生物有限公司)；全自动凝胶图像分析(美国Bio-rad)、荧光定量PCR仪7000型(美国ABI公司)。

1.2方法

1.2.1细胞培养 含10%胎牛血清的细胞培养基(RPMI)培养膀胱癌细胞株，于37 ℃、5%CO2(体积分数)培养箱中孵育，每2 d传代1次。……