吴帅帅， 乔小放， 赵红梅， 王晓科， 王海亮， 于 翔， 刘 军

胶质瘤(glioma)是指上皮组织来源的肿瘤，是最常见的原发性颅内肿瘤[1]，成人中的发病率为8/10万。依据WHO分级系统，其分为WHOⅠ～Ⅳ级，Ⅰ级和Ⅱ级属于低级别胶质瘤，Ⅲ级和Ⅳ级属于高级别胶质瘤，其中胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme，GBM)是恶性程度最高的高级别胶质瘤。临床表明，手术治疗是脑胶质瘤的首选方法，但胶质母细胞瘤浸润生长，与脑组织界限不清等特点，造成外科手术难以全部切除。加上恶性脑胶质瘤对放化疗的治疗不是很敏感，因此，为了延长患者生存期及改善远期生活质量，胶质母细胞瘤的治疗需要其他辅助方案。本实验从生物治疗方法出发，以动物实验模型，研究白细胞介素2(IL-2)激活的自然杀伤细胞(NK细胞)对脑胶质具有一定程度的杀伤作用，希望为今后进一步研究提供有利依据。

1 材料与方法

1.1 NK细胞分离与纯化 细胞提取：采集静脉血50 ml →肝素抗凝→PBS稀释抗凝外周血→加10 ml淋巴细胞分离液，离心15 min →取界面层细胞→再次离心10 min →PBS洗涤液混匀、离心弃上清→重复洗涤细胞操作1次→将细胞用PBS悬浮，待用。

NK细胞纯化：(1)将以上所得细胞→加入分离缓冲液和抗CD56免疫磁珠比例混合→避光孵育15 min→加入1 ml 的PBS磷酸缓冲液离心，去上清→ PBS缓冲液悬浮细胞，备用。(2)PBS磷酸缓冲液细胞→加入ACS磁场分离→收集分选的阴性细胞→加入RPMI 1640培养基1 ml→分选的CD3-CD56+阳性细胞→获得NK细胞→培养基悬浮细胞，待用。

NK细胞培养：100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素的RPMI1640细胞培养基悬浮NK 细胞→接种于适量培养基的培养瓶→置37 ℃，5%二氧化碳的培养箱中培→以培养24 h后的NK细胞作为备用细胞。……