余 璐， 林 立， 李海燕， 温顺航， 张海邻， 李昌崇

(温州医科大学附属第二医院， 育英儿童医院， 浙江 温州 325027)

肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae，SP)是儿童社区获得性肺炎的最常见病原细菌。肺炎链球菌肺炎的严重度与细菌表面毒力因子及宿主自身免疫反应密切相关。

分泌型白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor，SLPI)存在于上皮细胞，包括气管和支气管上皮细胞及肺泡II型上皮细胞，是一种非糖基化单链多肽蛋白，具有抗菌、抗病毒和抗炎等多方面生物学活性[1]。有研究表明，姜黄素(curcumin，Cur)具有抑菌、抗炎和抗氧化等多种生物学活性，在细菌感染性疾病中有治疗潜能，但Cur在溶液中稳定性低，因而生物学活性受影响，而其衍生物Y20(C21H16BrF3O)和6B(C26H25NO7)稳定性高，克服了姜黄素这一缺点。目前SP感染后SLPI的分泌情况及Cur及其衍生物Y20和6B对SLPI表达的影响尚无定论。本研究通过建立SP体外感染模型，以Cur、Y20和6B预处理，在感染各时点检测SLPI、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β，IL-1β)、Toll样受体2(Toll-like receptor 2，TLR2)和核因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)p65的水平，探讨Cur及其衍生物对SP感染时SLPI、TNF-α和IL-1β表达的调控及可能机制，同时比较3种药物对SP感染后SLPI、TNF-α和IL-1β表达的不同影响。

材 料 和 方 法

1实验材料

1.1细胞与细菌 肺炎链球菌购自美国模式培养物集存库(American Type Culture Collection，ATCC)。人支气管上皮细胞BEAS-2B 购自中科院上海细胞生物研究所细胞库。

1.2主要试剂 澳洲胎牛血清、DMEM高糖培养基、0.25%胰蛋白酶、0.02% EDTA溶液、链/青霉素、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)和磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline，PBS)等购自Thermo Fisher Scientific；抗NF-κB p65和TLR2抗体购自Cell Signaling Technology；人TNF-ɑ和IL-1β ELISA定量试剂盒购自上海西塘有限公司；TRIzol试剂购自Invitrogen；逆转录试剂盒购自TaKaRa；哥伦比亚血琼脂平板购自温州康泰生物科技有限公司；……