甘桂香， 胡瑞成， 谭双香

(湖南省人民医院呼吸内科， 湖南 长沙 410016)

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一种严重危害人类健康的常见病、多发病，其病情常呈进行性发展，最终导致患者劳动能力丧失和死亡，给社会造成沉重的经济负担。香烟烟雾(cigarette smoke, CS)中的氧化性物质可通过内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)导致肺结构细胞凋亡，促进COPD的发生发展[1]。CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein，CHOP)在正常生理状态下基本检测不到，但在ERS状态下表达显著升高，是ERS的标志。本研究通过TUNEL法检测肺组织细胞的凋亡，并通过检测PERK/eIF2α信号通路在COPD大鼠中的表达情况，为COPD的防治提供新方向。

材 料 和 方 法

1动物

清洁级雄性Wistar大鼠40只(湖南中医药大学实验动物中心提供)，动物合格证编号为SCXK(湘)2013-0003，体重(200±20) g，鼠龄10周。将大鼠随机分为对照(control)组、吸烟2个月(exposed to CS for 2 months, CS-2)组、吸烟4个月(CS-4)组及戒烟1个月(ex-smoking, Ex-S)组，每组10只。参照王慧等[2]方法建立COPD大鼠模型，每日将大鼠置于自制染毒箱内,暴露于10支香烟中2次(对照组大鼠也置于染毒箱内做伪暴露)，每次1 h，2次之间相隔不少于 4 h；开始燃烧4支香烟,随后每次2支香烟，每支香烟燃烧约12 min，换烟间歇3 min。吸烟组分别吸烟2个月和4个月;戒烟1个月组即大鼠吸烟4个月后暴露于常氧条件下1个月。

2实验试剂及仪器

芙蓉牌香烟(湖南中烟工业有限责任公司，尼古丁1.0 mg/支，焦油12 mg/支)；TUNEL试剂盒购自武汉博士德生物公司；抗蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)、p-PERK、真核起始因子(eukaryotic initiation factor, eIF)2α、p-eIF2α和CHOP抗体购自Santa Cruz；抗β-actin抗体、总蛋白提取试剂盒、BCA蛋白浓度检测试剂盒、SABC免疫组化试剂盒、辣根过氧化物酶标记的 II 抗、DAB显色剂和原位杂交试剂盒购自武汉博士德生物公司；……