谭荣鉴

临床上,地中海贫血是由于人体珠蛋白基因的突变,造成某一种珠蛋白链合成减少或者是缺失,从而引起血红蛋白的组分发生改变的一组严重威胁人类健康的致死、致残常染色体隐性遗传性血液病,包括有α地中海贫血、β地中海贫血［1］。在我国南方地区,地中海为一种常见单基因遗传性疾病。曾有研究显示,常见的α贫血基因缺失类型主要包括 -SEA、-α3.7、-α4.2,除此外 ,-THAI也是我国南方人群存在的常见缺失类型［2,3］。本次研究中,以对小儿α和β地中海贫血基因类型进行分析探讨为目的,对本院收治的疑似地中海贫血患儿的临床检测资料展开了回顾性分析,现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选择2012年1月～2017年12月本院收治的986例疑似地中海贫血患儿为研究对象,男672例,女314例,年龄10 d～12岁,平均年龄(2.6±2.1)岁。以《血液病诊断机疗效标准》中“珠蛋白生成障碍性贫血诊断标准”和《地中海贫血预防控制操作指南》中“α、β地中海贫血的临床分类、临床特征”为依据。纳入标准：①血液学指标检测结果：平均红细胞体积(MCV)＜80 fL和(或)平均红细胞血红蛋白含量(MCH)＜27 pg。②血红蛋白电泳结果证实存在地中海贫血；③家族中有地中海贫血基因携带者或患儿。排除标准：已经接受输血治疗的地中海贫血患儿。所有患儿家属均自愿接受临床检验并签署知情同意书,本研究经医院伦理委员会批准。

1. 2 方法

1. 2. 1 研究方法 采用Gap-PCR检测缺失型α地中海贫血,采用RDB技术对α和β地中海贫血基因点突变进行检测,利用巢式PCR检测疑似HKαα的样本,同时利用基因测序对疑似罕见地中海贫血的样本进行验证。

1. 2. 2 检测方法 ①仪器与试剂：PCR扩增仪、电泳仪和凝胶成像系统(美国Bio-Rad公司),XS-1000i全自动五分类血球计数仪(日本Sysmex公司),5430小型台式高速离心机(德国Eppendorf公司),Capillarys2全自动毛细管电泳分析仪 (法国 Sebia 公司 ),NanoDrop 2000c 微量分光光度计 (美国Thermo公司),YN-H16恒温杂交仪(深圳亚能公司),全血DNA快速提取试剂盒和珠蛋白生成障碍性贫血基因检测试剂盒(深圳亚能公司)。②标本采集：采集本院收治的疑似地中海贫血患儿静脉血 2 ml,经 EDTA-K2 抗凝后 ,在 -80℃条件下保存。③地中海贫血实验室筛查：经XS-1000i全自动五分类血球计数仪及其配套试剂对红细胞计数、血红蛋白、平均红细胞血红蛋白量、平均红细胞体积进行检测。经Capillarys 2全自动毛细管电泳分析仪及其配套试剂对血红蛋白、血红蛋白、胎儿血红蛋白、异常血红蛋白进行检测,所有检测均严格按照操作说明书进行。④基因检测：首先进行基因组DNA提取,采集受试患儿200 μl静脉血标本,以全血DNA快速提取试剂盒说明书操作为依据,对基因组DNA进行提取。而后进行缺失基因型检测。

1. 3 统计学方法 采用Excel 2007软件整理数据,经描述性统计方式对986例小儿α和β地贫基因突变类型及频率分布进行分析。

2 结果

2. 1 地中海贫血基因检测结果 检出地中海贫血758例(76.88%),其中α地中海贫血400例(40.57%),β地中海贫血332例(33.67%),αβ复合型地中海贫血者26例(2.64%)。

2. 2 地中海贫血基因类型分布特征与突变频率 400例α地中海贫血患儿中,检出17种α地中海贫血突变基因类型,-SEA/aa所占比例为76.5%。332例β地中海贫血患儿中,检出24种突变基因类型,IVS-2-654(C→T)杂合子所占比例为33.4%,mm1-42(-TCTT)杂合子所占比例为33.4%。26例αβ复合型地中海贫血患儿中,突变基因类型以IVS-2-654/N+--SEA/aa和 IVS-2-654/N + -α3.7/aa为主。

2. 3 罕见地中海贫血基因检测结果 检出HKαα/ααQS、α-地中海贫血突变基因类型CD61(AAG→TAG)/--SEA 1例,β地中海贫血基因突变类型CD5(CCT→C)1例。

3 讨论

世界卫生组织对地中海的诊断标准中指出,6岁以下儿童 ,血红蛋白标准为 120 g/L,若是不足这一水平 ,则可视为贫血［4］。在我国,贫血是儿童保健重点防治项目。曾有文献报道,在6岁以下贫血患儿中,有90.00%以上为缺铁性贫血,6 个月 ～2 岁婴幼儿中 ,缺铁性贫血更为常见［5,6］。

曾有研究显示,在地中海贫血人群中,绝大部分患者均会携带地中海贫血缺失基因,但是并未表现出明显的临床症状［7,8］。目前的最终目标依旧是选择性阻止重型地中海贫血胎儿的出生。现阶段,地中海贫血干预防控手段中,对阴性人群的研究相对较少,多集中在地中海贫血筛查阳性人群的地中海贫血基因型分布的研究［9,10］。

本次研究中,以对小儿α和β地中海贫血基因类型进行分析探讨为目的,对本院收治的疑似地中海贫血患儿的临床检测资料展开了回顾性分析,结果显示,检出地中海贫血758例(76.88%),其中α地中海贫血400例,β地中海贫血332例,αβ复合型地中海贫血者26例,400例α地中海贫血患儿中,检出17种α地中海贫血突变基因类型,-SEA/aa所占比例为76.5%。332例β地中海贫血患儿中,检出24种突变基因类型,IVS-2-654(C→T)杂合子所占比例为33.4%,mm1-42(-TCTT)杂合子所占比例为33.4%。26例αβ复合型地中海贫血患儿中,突变基因类型以IVS-2-654/N+-- SEA/aa和IVS-2-654/N+-α3.7/aa为主。检出HKαα/ααQS、α-地中海贫血突变基因类型CD61(AAG→TAG)/--SEA1例,β地中海贫血基因突变类型CD5(CCT→C)1例。这一结果与相关文献结果相似［11］。

综上所述,小儿地中海贫血的基因突变类型呈现出复杂多样性,存在罕见病例,临床治疗中应对其给予足够的重视。