刘思含，耿德勤，吴明凤，刘芷含

双环己酮草酰二腙(CPZ)诱导的脱髓鞘动物模型是CNS脱髓鞘疾病常见的研究模型之一。拉喹莫德(LAQ)是一种新型的免疫调节药物，近年来它被建议作为多发性硬化治疗的口服制剂。过去动物研究表明，它有抗炎、抑制抗原表达的基因等作用，但目前拉喹莫德作用机制尚未充分理解。研究[1-2]发现，拉喹莫德能减轻实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)及CPZ造模小鼠胼胝体区髓鞘脱失症状，但目前它保护神经功能的机制尚不清楚。本研究通过应用拉喹莫德，观察其对CPZ诱导的CNS脱髓鞘小鼠胼胝体区髓鞘碱性蛋白(MBP)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及其分泌的TNF-α和IL-1β表达的影响，以探讨LAQ对髓鞘保护的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及分组 80只健康雄性C57BL/6小鼠，体质量23～25 g，由徐州医科大学实验动物中心提供。随机分为正常对照组(20只)、CPZ模型组(40只)及LAQ处理组(20只)。

1.1.2 主要试剂和仪器 CPZ(美国Sigma公司)；LAQ (ABR-215062)；羊血清(北京中杉金桥生物技术有限公司)；鼠抗MBP(美国Abcam公司)；鸡抗GFAP(美国Abcam公司)；IL-1β 小鼠ELISA试剂盒(美国Abcam公司)；TNF alpha小鼠ELISA试剂盒(美国Abcam 公司)；冰冻切片机(德国Leica公司)；正置显微镜(日本Olympus BX60)。

1.2 方法

1.2.1 CPZ模型及药物干预方法 将CPZ掺入正常饲料组成0.3%的混合粉末。正常组给予正常饲料喂养，CPZ组给予喂养含有0.3% CPZ混合饲料，LAQ处理组喂食0.3% CPZ混合饲料同时给予LAQ灌胃(25 mg/kg)，每日1次，共8周。

1.2.2 MBP及GFAP免疫荧光检测 采用免疫荧光法检测脑组织MBP及GFAP阳性细胞分布。制备小鼠脱髓鞘后, 将CPZ组各时间点(0 d, 3 d, 7 d, 2周, 4周, 8周)小鼠(均随机取3只)经10%水合氯醛(1 ml/kg)腹腔注射麻醉，迅速开胸暴露心脏。……