初云海，来杰，贾静丽，国紫薇，田明*

(1.黑龙江中医药大学第一附属医院，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江省食品药品检验所，黑龙江 哈尔滨 150088；3.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

栀子厚朴汤对小鼠抗抑郁作用研究

初云海1，来杰2，贾静丽3，国紫薇3，田明3*

(1.黑龙江中医药大学第一附属医院，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江省食品药品检验所，黑龙江 哈尔滨 150088；3.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

目的：研究评价栀子厚朴汤抗抑郁的药效学作用。方法：选用小鼠行为绝望模型小鼠悬尾和强迫游泳实验，以及利血平引起的体温下降拮抗实验和育亨宾毒性增强实验，评价栀子厚朴汤抗抑郁作用及机制。结果：栀子厚朴汤的高、中剂量组(24 g/kg，12 g/kg)能显著减少小鼠悬尾不动和强迫游泳不动时间(P<0.05)；栀子厚朴汤高、中、低三个剂量组(24 g/kg、12 g/kg、6 g/kg)能有效抵抗利血平引起的体温下降并增强育亨宾对小鼠的毒性(P<0.05)。结论：栀子厚朴汤具有抗抑郁的作用。

栀子厚朴汤;抗抑郁

栀子厚朴汤出自《伤寒论》，由栀子、厚朴、枳实三味药组成，具有清热除烦，宽胸消满之功效。中医临床是主治热扰胸腹证的基础方。本文用栀子厚朴汤对小鼠抗抑郁作用及机制进行了研究。

1 实验材料与仪器

1.1 动物

清洁级昆明小鼠，体质量20±2 g，雄性，由黑龙江中医药大学药物安评中心提供。

1.2 药品与仪器

栀子厚朴汤(自制，栀子14 g,厚朴12 g,枳实4 g，水煎煮，滤过，滤液浓缩制成1 g/mL的流浸膏)。盐酸氯米帕明(上海信谊九福药业有限公司，100601)，利血平注射液(天津金耀氨基酸有限公司，1005281)，育亨宾(yohimbine,广州市金华大化学试剂有限公司，200543)。电子体温计(倍尔康jxb-178)，秒表(深圳市君斯达实业有限公司)，自制悬尾支架。

2 实验方法

2.1 对急性应激所致动物绝望行为的影响

2.1.1 分组及给药方法

小鼠50只随机分成5组，即空白组、阳性对照组、栀子厚朴汤高、中、低剂量组。阳性对照组盐酸氯米帕明40 mg/kg，低、中、高剂量栀子厚朴汤组(6 g/kg、12 g/kg、24 g/kg)，空白组灌胃给予生理盐水，每组均按0.4 mL/10 g体质量灌胃给药，每日1次，连续给药7天。

2.1.2 小鼠悬尾实验(TST)

参照 Steru等[1]的方法，小鼠末次灌胃给药1 h后，将小鼠尾端(在距尾尖2 cm处)用胶布固定在自制悬尾支架上，使其呈倒悬状态，头部离悬尾箱底约5 cm，每次同时测试2只动物，相互之间用纸板隔开。适应2 min后，记录4 min之内，累计不动时间(小鼠停止挣扎)。

2.1.3 小鼠强迫游泳实验(FST)

参照Porsolt等[2-3]的方法，小鼠于末次给药后1 h，将小鼠单个放入高20 cm、直径18 cm、水深10 cm、水温(30±2)℃的水槽中，记录累计不动时间(小鼠在水中停止挣扎或呈漂浮状态)。

2.2 小鼠利血平拮抗实验

2.2.1 分组及给药方法

小鼠60只随机分成6组，即空白组、模型组、阳性对照组、栀子厚朴汤高、中、低剂量组。阳性对照组盐酸氯米帕明40 mg/kg，高、中、低剂量栀子厚朴汤组(24 g/kg、12 g/kg、6 g/kg)，空白组每天给予等量的生理盐水，每组均按0.4 mL/10 g体质量灌胃给药。每日灌胃一次，连续给药7天。

2.2.2 体温下降的观测

参考Schelkunov[4-5]的方法，于末次给药后1 h，除空白组外，腹腔注射4 g/kg利血平注射液，空白组腹腔注射等量的生理盐水，4 h后测量体温。记录各组数据，比较给药组及对照组中体温的差异。

2.3 小鼠育亨宾毒性增强实验

2.3.1 分组及给药方法

小鼠120只随机分成6组，即空白组、模型组、阳性对照组、栀子厚朴汤高、中、低剂量组。阳性对照组盐酸氯米帕明40 mg/kg，栀子厚朴汤高、中、低剂量组(6 g/kg、12 g/kg、24 g/kg)，空白组每天给予等量的生理盐水，每组均按0.4 mL/10 g体质量灌胃给药，每日1次，连续给药7天。

2.3.2 小鼠死亡率的观测

参考Quinton[6-7]的方法,每只小鼠末次灌胃给药1 h后，除空白组给予生理盐水外，其余各组小鼠皮下注射育亨宾40 mg/kg。观察注射育亨宾18 h后，各组小鼠的死亡率。记录小鼠的死亡率，比较给药组、对照组小鼠的死亡率。

2.4 数据处理方法

3 实验结果

3.1 小鼠悬尾实验(TST)

实验结果见表1，栀子厚朴汤中剂量组(12 g/kg)与高剂量组(24 g/kg)均能缩短小鼠的不动时间，与空白组比较P<0.05差异显著，且高剂量效果最好。

表1 栀子厚朴汤对小鼠悬尾不动时间的影响

注：与空白组比较,*P<0.05

3.2 小鼠强迫游泳实验(FST)

实验结果见表2，栀子厚朴汤中剂量组(12 g/kg)与高剂量组(24 g/kg)均能缩短小鼠的不动时间，与空白组比较P<0.05差异显著，且中剂量效果最好。

表2 栀子厚朴汤对小鼠强迫游泳不动时间的影响

注：与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01

3.3 小鼠利血平拮抗作用实验

实验结果见表3，栀子厚朴汤低、中、高三个剂量组均能拮抗利血平所致的温度下降，与空白组比较P<0.05差异显著。

表3 栀子厚朴汤对利血平所致小鼠体温下降的影响

注：与空白组比较,▲P<0.05;与模型组比较,*P<0.05

3.4 小鼠育亨宾增强实验

实验结果见表4，栀子厚朴汤低、中、高三个剂量组均能显著增加皮下注射育亨宾40 mg/kg小鼠的死亡率，与空白组比较P<0.05差异显著。表明该方可能是通过影响去甲肾上腺素(NE)能神经传递，产生抗抑郁作用。

表4 栀子厚朴汤对小鼠育亨宾毒性增强作用的影响

注：与空白组比较,▲P<0.05;与模型组比较,*P<0.05

4 讨论

抑郁症是一种情感性精神障碍，以显著而持久的心境低落为主要临床特征，中医学属于郁症的范畴[8]。抑郁症发病机率高，危害性大，严重影响人类的身心健康[9]。在抑郁症治疗药物筛选中，FST和TST实验[10]常用作行为绝望模型(behavioural despair，BD)应用，也是行为药理实验中用于筛选和观察抗抑郁药物的可靠的实验方法[11]，更是经典的抗抑郁评价模型[12]，虽然这一模型存在难以克服的药物作用的假阳性和假阴性反映问题，但与其他抑郁模型相比，该方法简单、快捷，有可靠性强的特点[13]。本实验合并使用FST和TST两种模型对栀子厚朴胶囊的初步研究，结果表明栀子厚朴汤高、中剂量组均能减少小鼠强迫游泳和悬尾的不动时间，说明了栀子厚朴汤对绝望引起的抑郁症状有作用。

利血平是一种囊泡再摄取抑制剂，它能使神经递质甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)等耗竭，引起如体温下降等生理上的变化[14]。本实验通过小鼠利血平拮抗作用和小鼠育亨宾增强实验，显示栀子厚朴汤能拮抗利血平所致的小鼠体温下降；能增强育亨宾毒性。因此本实验初步推测栀子厚朴汤的抗抑郁作用机制，可能是与阻断NE、5-HT等单胺类神经递质的重摄取而抑制其生物胺失活，从而影响脑单胺递质受体功能状态有关。

《伤寒论》说:“伤寒下后，心烦腹满，卧起不安者，栀子厚朴汤主之。”此方虽小，主治却很明了。栀子除心烦，厚朴消胸腹胀满，枳实除心下痞闷[15]。此方与小承气汤仅一味之差，虽都治腹满，然小承气汤所治偏下，本方所主则病位偏上。“卧起不安”点出了病情的严重程度，也暗含了失眠之义。临床上遇到神经官能症、焦虑症、失眠症，应用此方则患者的精神状态随之好转[16]。栀子厚朴汤处方各药味所含的主要药效成分，如厚朴酚、栀子苷、橙皮苷等多有抗抑郁作用的实验研究[17]。栀子厚朴汤虽然是一个经典小方，但具有进一步研究开发价值。

[1] Steru L,Chermat R,Thierry B,et al.The tail suspension test:Anew method for screening antidepressants in mice[J].Psychopharmacology,1985,85(16):367-370.

[2] Porsolt RD,Bertin A,Jalfre M.Behavioral despair in mice: a primary screening test for antidepressants[J].Arch Int Pharmacodyn Ther,1977,229(12):327-336.

[3] Nixon MK.Additive effects of Lithium and antidepressants in the forced swimming test:further evidence for involvement of the serotoninergic system[J].Psychopharmacology,1994,115(9):59-64.

[4] Pawlowski L,Mazela H.Effects of antidepressant drugs ,selective noradrenaline Uptake inhibitors,on apomorphine-induced hypohermia in mice[J].Psychopharmacology,1986,88(5):240-246.

[5] Alpermann HG,Schacht U,Usinger P,et al.Pharmacological effects of Hoe 249:A new potential antidepressant [J].Drug DevRes,1992,259(6):267-282.

[6] Malick JB. Potentiation of yohimbine-induced lethality in mice:predictor of antidepressant potential[J].Drug Dev Res, 1983,22(3): 357-363.

[7] Alpermann HG,Schacht U,Usinger P,et al. Pharmacological effects of Hoe 249: A new potential antidepressant[J].Drug Dev Res, 1992,25(3):267-282.

[8] 王永炎.中医内科学[M].上海:上海科学技术出版社,1998:274.

[9] 杨书彬，杨绍杰，卢春雪.中药开心散抗抑郁症的机制研究进展[J].中医药学报，2016，44(1)：79-81.

[10] Brugge K L，Hingtgen J N，Aprison M H，et al. Potentiated 52 hydroxytryptopan induced response suppression inrats following chronic reserpine[J]. Pharmacol BiochemBehavl，1987，26(2):287.

[11] 徐志伟,吴丽丽,严灿.逍遥散和丹栀逍遥散抗抑郁作用的实验研究[J].中医药学报，2016，31(3)：79-81.

[12] 王文凯，孙雯，李廷利.生、炒酸枣仁配伍抗抑郁作用研究[J].中医药学报，2016，42(2):13-15.

[13] 吕俊华,钟玲.实验性抑郁症动物模型的评价[J].中国病理生理杂志，2001，17(9):916.

[14] 季宇彬.中药有效成分药理与应用[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社,2004：123-124.

[15] 张仲景.伤寒论[M].北京:中国中医药出版社,2006:10.

[16] 萧美珍.栀子厚朴汤临证一得[J].湖南中医学院学报,1989,9(2):951.

[17] 屈晓晟，杨义芳，张静.栀子厚朴汤的不同提取方法及其抗抑郁谱效[J].中国医药工业杂志，2014,45(5):424-427.

R285.5;R277.7

A

1002-2392(2017)06-0049-03

2017-06-23

2017-11-12

黑龙江省中医药科研项目(ZHY16-094)

初云海(1973-),男，副主任药师，主要研究方向：从事中药调剂及方剂研究工作。

*通讯作者：田明(1963-),男，教授，硕士研究生导师，主要研究方向：中药新药研发。