王 巍，练有浩，官全生，黄永彬，梁文君，文瑞婷，梁 亮，杨志刚

(广东医科大学 血液病研究室、广东医科大学附属医院 血液科，广东 湛江524001)

FISH技术检测骨髓异常综合征四种常见染色体异常

王 巍，练有浩，官全生，黄永彬，梁文君，文瑞婷，梁 亮，杨志刚

(广东医科大学 血液病研究室、广东医科大学附属医院 血液科，广东 湛江524001)

目的评估荧光原位杂交(FISH)技术在检测骨髓增生异常综合征(MDS)常见染色体异常中的价值。方法FISH方法检测47例新诊断MDS患者-5/5q-、-7/7q-、+8、-20/20q-染色体异常，并与15例染色体核型结果比较。结果47例患者中，-5/5q-、-7/7q-、+8、-20/20q-染色体异常FISH方法总检出率44.7%，其中5q-最常见，其次是+8、-7/7q-，-20/20q-最少见。中期分裂相不足10个时，FISH法可提高染色体异常检出率；分裂相达10个以上，两种方法对上述染色体异常检测结果基本一致。结论本室FISH方法检测MDS患者-5/5q-、-7/7q-、+8、-20/20q-染色体异常总检出率与文献报道基本一致；染色体核型和FISH同时做，可提高MDS患者染色体异常检出率。

骨髓增生异常综合征；荧光原位杂交；染色体异常

(ChinJLabDiagn,2017,21:2046)

骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic syndromes，MDS)是一组源于造血干细胞的获得性克隆性疾病，以髓系中一系或多系血细胞减少或发育异常、无效造血以及急性髓系白血病发病风险增高为特征。约40%-70% MDS患者具有非随机的克隆性染色体异常，对染色体进行分析是MDS诊断分型、预后判断不可缺少的一部分[1]。目前常规检测染色体的方法是核型分析，但由于技术方法所限或一些疾病本身细胞分裂指数低，部分标本不能获得足够数量和高质量的中期分裂相供分析。荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization，FISH)技术具有快速、准确、不需获得中期分裂相的优点，现已越来越多地应用于临床。本文应用FISH方法检测了47例MDS患者-5/5q-、-7/7q-、+8、20q-染色体异常，并与常规细胞遗传学结果比较，以评估FISH方法在检测MDS常见染色体异常中的应用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集广东医科大学附属医院血液科2013年1月至2016年11月经骨髓细胞形态学和/或骨髓活检确诊的初发MDS 患者47例，其中男28例，女19例，男女比例约为1.5∶1，中位年龄64岁(16-83岁)。按照2016 WHO MDS分型诊断标准[2]，MDS-SLD 1例，MDS-MLD 14例，MDS-RS-SLD 1例，MDS-RS-MLD 1例，MDS 5q- 2例，MDS-U 1例，MDS-EB-1 12例，MDS-EB-2 15例。

1.2 方法

1.2.1荧光原位杂交技术(FISH)

抽取肝素钠或EDTA抗凝骨髓液2-4 ml，经低渗、固定后调整细胞浓度滴片，按照探针说明书老化、脱水、变性、杂交、洗片及复染，然后在Zeiss荧光显微镜下观察荧光信号，Isis软件进行图像采集。

5q缺失探针、7q缺失探针、+8探针、20q缺失探针购自英国Cytocell公司，检测位点依次为D5S630(5p15.31)/EGR1(5q31.2)，D7S658(7q22.1-q22.2)/ D7S486 (7q31.2)，D8Z1 (8p11-q11)，D20S108 (20q12)/D20S150(20q13.12)。每例分析200个间期细胞，以20例非恶性血液病患者检测结果设定阈值(`x±3s)，超过阈值上限为阳性。5q、7q、20q缺失探针正常荧光信号模式为间期细胞内2红2绿，+8探针为2绿。5q缺失探针异常信号模式：细胞内1红2绿，提示del 5q31，上限3.82%；1红1绿，提示-5，上限3.67%。7q缺失探针异常信号模式：1红1绿，提示-7或7q-，上限2.5%，该探针不能区分-7和7q-。20q缺失探针异常信号模式：1红1绿，提示-20或20q-，上限3.49%，不能区分-20和20q-。+8探针异常信号模式：3绿，提示+8，上限2.77%。

1.2.2染色体核型分析

采用骨髓细胞24 h短期培养法，操作按照常规，G显带技术进行核型分析。染色体核型按照《人类细胞遗传学国际命名体制(ISCN2013)》的规定进行描述。

1.3 统计学分析

采用SPSS17.0软件进行统计学分析，四格表资料组间比较采用χ2检验，P<0.05认为有统计学差异。

2 结果

2.1 血常规结果

47例MDS患者均有贫血(Hb<110 g/L)，如按WHO对MDS血细胞减少的定义，Hb<100 g/L者45例，占95.7%；WBC正常或减低，其中减低33例，占70.2%；PLT可稍增高、正常或减低，其中减低34例，占72.3%。三系中全血细胞减少26例，占55.3%；2系减少18例，占38.3%；1系减少3例，占6.4%(表1)。

表1 47例MDS患者血常规结果

2.2 FISH检测结果

47例MDS患者中21例检出染色体异常，检出率44.7%。其中单条染色体异常10例，占47.6%；两条染色体异常9例，占42.9%；三条染色体异常2例，占9.5%；四条染色体同时累及的未见。5q-为最常见染色体异常(12例，25.5%)，其次是+8(9例，19.1%)和-7/7q-(8例，17%)，-20/20q-最少见(5例，10.6%)(表2)。低原始细胞比例MDS(<5%)20例，占42.6%，高原始细胞比例MDS(≥5%)27例，占57.4%，两组上述四种染色体异常检出率无显著差异(表3)。

表2 47例MDS患者5、7、8、20号染色体异常检出情况

表3 低、高原始细胞比例MDS患者5、7、8、20号染色体异常FISH检出率比较

2.3 染色体核型分析结果

47例MDS患者中15例进行了常规染色体核型分析，其中3例无分裂相，5例未分析够20个分裂相，仅7例合格，合格率46.7%。在无分裂相的3例患者中有2例FISH检出异常(例8和例9)。分裂相不足10个的3例患者，染色体分析均为正常核型，但1例FISH检出异常(例7)。分裂相10-20个2例患者中，1例FISH与核型结果相符(例13)，1例FISH检出了核型未检出的异常(例4)。分裂达20个以上的7例患者中，2例为正常核型，5例检出染色体异常。2例正常核型患者FISH结果亦阴性。5例染色体异常患者中1例FISH阴性，因为该例染色体异常不在FISH探针检测范围内(例15)；其余4例所涉及染色体异常均包括5、7、8或20号染色体，1例FISH未检出核型中的-20异常(例3)，余均检出所在染色体异常。但仔细对比结果发现，部分病例FISH所检出染色体异常虽与核型异常在同一条染色体上，但信号提示结果与核型结果并不完全一致，如例6和例13 FISH信号提示5q-，而核型结果为-5，见表4。

表4 15例MDS患者FISH与常规细胞遗传学检测结果

*5q缺失探针信号均为1红2绿，提示5q-。

3 讨论

MDS主要发生于老年人，男性多于女性。本组患者中位年龄64岁，男女比例约1.5∶1，与教材[3]基本一致。从血常规检测结果看，几乎所有患者均有贫血，WBC数减低或正常，PLT可以减低、正常或稍增高。超过半数MDS患者存在全血细胞减少，单纯1系减少的比例少见，约占6.4%，与陈安宝等报道的基本一致[4]。

MDS是一组高度异质性疾病，涉及一系或多系血细胞发育异常。骨髓染色体畸变类型也较复杂，有数目异常，也有结构异常，所累及染色体中以-5/5q-、-7/7q-、+8、20q-异常最常见。本组47例MDS患者中，FISH方法检测上述四种染色体异常总检出率为44.7%，与天津血研所42%[5]和湘雅医院48%报道的基本一致[6]。其中单条染色体异常和两条染色体异常的比例大致相当，分别为47.6%和42.9%，而三条染色体同时异常的较少见(9.5%)，四条染色体同时累及的未见。5q-为最常见染色体异常，其次是+8、-7/7q-，20q-最少见。而湘雅医院报告的FISH检测100例MDS患者中，阳性检出率从高到低依次为-5/5q-、20q-、+8、-7/7q-[6]。天津血研所FISH联合染色体核型分析检测112例MDS患者，阳性检出率从高到低依次为+8、-7/7q-、-5/5q-、20q-[5]，可见在此方面各家医院差异较大，可能与所用FISH探针覆盖区域不同、地域差异及研究病例数偏少等有关。

文献报道，约35%-40%的MDS患者可转化为急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)，核型演变可能是MDS转白的原因之一[7]。陈宝安等[4]用常规细胞遗传学方法检测49例MDS患者，发现原始细胞比例增高(RAEB、RAEB-T)患者比原始细胞比例不高(RA、RAS)患者染色体异常检出率高(78.3% VS 42.3%，P<0.05)，染色体异常组转白率高于正常组。而本组研究中原始细胞比例增高患者染色体异常检出率虽高于原始细胞比例不高患者(48.1% VS 40.0%)，但差异无统计学意义(P>0.05)。分析原因主要与FISH方法局限性即不能检测探针覆盖不到区域染色体异常有关，这也是FISH方法不能替代染色体核型分析的原因。

47例MDS患者中15例进行了常规染色体核型分析，达标(20个分裂相)的仅7例，达标率约46.7%。3例即1/5左右患者无分裂相可供分析，分裂相不足10个的核型结果可靠性下降，即一些正常核型FISH检出异常，而FISH 100%可检测出结果，因此有条件的患者建议核型和FISH同时做，以提高染色体异常检出率、缩短患者住院时间；同时，获得足够数量和高质量的分裂相仍是染色体核型分析技术要努力解决的问题。从分裂相达到10个以上的核型与FISH对比结果来看，两者检测结果基本一致，但部分病例FISH信号所提示染色体异常与核型结果不一致，仔细观察肖雅娟等[9]、高冬格等[10]的FISH与核型结果也存在不一致情况，说明是个普遍问题，分析原因可能与分裂相质量、FISH探针质量、阅片者经验等因素有关。另外，本组1例FISH未全部检出核型中的异常；1例FISH 5q-、-7/7q-阳性比例不高，尤其是-7/7q-，仅4.5%，易漏诊；而核型结果10个分裂相中5个有-5、del(7)(q22)，比例并不低，说明FISH结果也不是万无一失的，核型结果也是FISH结果的补充和验证。

综上所述，尽管中期分裂相的数量和质量制约着染色体核型结果的准确性，但其仍然是染色体检测常规且不可替代的方法，FISH方法是有益补充；为提高MDS患者染色体异常检出率和准确性，建议有条件患者同时做染色体核型和FISH检查。

[1]Greenberg PL,Tuechler H,Schanz J,et al.Revised International Prognostic Scoring System for Myelodysplastic Syndromes[J].Blood,2012,120(12):2454.

[2]Arber DA,Orazi A,Hasserjian R,et al.The 2016 revision to the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia[J].Blood,2016,127(20):2391.

[3]许文荣,王建中.临床血液学检验[M].第5版.北京:人民卫生出版社,2014:245.

[4]陈宝安,高 冲,丁 婕,等.65例骨髓增生异常综合症的临床及实验室分析[J].中国实验血液学杂志,2009,17(6):1472.

[5]曲士强,徐泽锋,李承文,等.FISH在骨髓增生异常综合征患者细胞遗传学评估中的作用[J].中华血液学杂志,2012,33(10):839.

[6]曹鹏飞,李 原,李晓林,等.FISH技术联合常规细胞遗传学检测MDS的染色体异常[J].中南大学学报医学版,2014,39(6):605.

[7]Navada,Shyamala C,Chatalbash,A,Silverman,Lewis R.,Clinical Significance of Cytogenetic Manifestations in Myelodysplastic Syndromes[J].Laboratory Medicine,2013,44(2):103.

[8]安 利,江 明.114例骨髓增生异常综合征的染色体核型与预后分析[J].中山大学学报(医学科学版),2014,35(4):575.

[9]肖雅娟,黄园鹭,许 娜,等.荧光原位杂交联合染色体核型分析在骨髓增生异常综合征诊断中的应用[J].热带医学杂志,2014,14(5):639,650.

[10]高冬格,李渤涛,周丽娜,等.50例MDS患者的细胞遗传学异常的荧光原位杂交检测和常规染色体核型分析研究[J].中国实验血液学杂志,2013,21(5):1190.

DetectionoffourcommonabnormalchromosomesbyFISHinmyelodysplasticsyndrome

WANGWei,LIANYou-hao,GUANQuan-sheng,etal.

(LaboratoryofHematology,GuangdongMedicalUniversity;DepartmentofHematology,AffiliatedHospitalofGuangdongMedicalUniversity,Zhanjiang524001,China)

ObjectiveTo evaluate the significance of fluorescence in situ hybridization (FISH) in detecting the common chromosomal abnormalities in patients with myelodysplastic syndrome(MDS).MethodsThe -5/5q-,-7/7q-,+8 and -20/20q- chromosomal abnormalities were detected by FISH in 47 patients with de novo MDS,and the results were compared with those of metaphase cytogenetics in 15 patients.ResultsThe total positive rate of -5/5q-,-7/7q-,+8 and -20/20q- abnormalities detected by FISH was 44.7%,and 5q- was the most common chromosomal abnormality,then +8 and -7/7q- abnormalities followed,-20/20q- was the fewest one.FISH testing can improve the positive rate of chromosomal abnormalities in cases with fewer than 10 metaphases,and the results of FISH testing were in accordance with those of metaphase cytogenetics in cases with more than 10 metaphases.ConclusionThe total positive rate of -5/5q-,-7/7q-,+8 and -20/20q- chromosomal abnormalities detected by FISH in our hospital is in accordance with reports.And metaphase cytogenetics and FISH should be carried out at the same time to improve the positive rate of chromosomal abnormalities in MDS patients.

Myelodysplastic syndrome;Fluorescence in situ hybridization;Chromosome abnormality

国家自然科学基金资助项目(81500131)；湛江市财政资金科技专项竞争性分配项目(2016A06003)

1007-4287(2017)12-2046-04

R551.3

A

王巍，女，42岁，博士，副教授，主要研究方向：白血病分子机理研究，现在上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院工作。

2017-07-14)