李艳丽，辛宇波，武文学，肖 帅*

(1.吉林省疾控中心环境所，吉林 长春130062；2.吉林大学中日联谊医院；3.长春市双阳区医院)

RacGAP1与Cyclin-D1在胃癌组织中的表达及意义

李艳丽1，辛宇波2，武文学3*，肖 帅2*

(1.吉林省疾控中心环境所，吉林 长春130062；2.吉林大学中日联谊医院；3.长春市双阳区医院)

Rac GTP酶活性蛋白-1(RacGAP1)是GTP酶活性蛋白家族的一员,研究发现RacGAP1在胃癌组织中高表达，且RacGAP1高表达的患者预后较差[1]。Pliarchopoulou等人的研究发现RacGAP1可以促进乳腺癌细胞的分裂与增殖[2]。细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)已经被证实在细胞周期的调控中起到重要作用，可以促进肿瘤细胞的增殖[3]。本文应用免疫组织化学法和western blot检测RacGAP1与Cyclin D1两种蛋白在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达情况，并分析二者之间及与临床病理资料的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料

实验组174例均选自我院基本外科2010年1月至12月收治的胃癌患者，其中男93例，女81例，年龄39-81岁，平均年龄(67.3±10.1)岁。所有患者均行胃癌根治术(D2清扫)，术后病理均为腺癌，其中低分化101例，中分化63例，高分化10例。肿瘤部位：胃窦/幽门79例，胃体56例，胃底/贲门39例。纳入标准：(1)均为首发胃癌；(2)术前未接受过任何放疗、化疗；(3)无其它恶性肿瘤病史；(4)病理资料完整。排除标准：(1)因肿瘤合并穿孔、出血，行急诊手术者；(2)合并其它器官(如心、肝、肾等)功能不全者；(3)合并免疫系统疾病者[4]。另选取门诊胃镜检查，病理为非萎缩性胃炎者100例作为对照组，其中男68例，女42例，年龄31-79岁，平均年龄(61.2±10.5)岁。病理取材位置：胃窦/幽门46例，胃体37例，胃底/贲门17例。两组受试者在性别比例、平均年龄等一般资料上无显著差异(P>0.05)。此次研究经过医院伦理委员会审查通过，所有患者均在术前告知实验内容，获得同意后签署知情同意书1份。

1.2方法

应用免疫组织化学法(S-P法)检测组织标本中RacGAP1与Cyclin D1的表达情况。手术切除胃组织后，避开肿瘤中心处坏死组织，取大小为0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm肿瘤组织作为实验组标本，对照组标本选用胃镜下活检的胃黏膜组织。用4%甲醛固定后，石蜡包埋，切成3 μm厚的4张连续切片。RacGAP1抗体选用兔抗人RacGAP1多克隆抗体(货号ab90550)，Cyclin D1抗体选用鼠抗人Cyclin D1单克隆抗体(PL0502539)，阴性对照抗体选用PBS缓冲液，S-P试剂与上述抗体均购自美国Abcam公司(上海)。阳性对照组为已知阳性切片。所有操作均严格按照说明书进行。

1.3判断标准

400倍镜下随机选取3个互不重叠的视野，计数视野内细胞总数与染色细胞数，计算染色细胞数所占比例。RacGAP1与 Cyclin D1均主要在细胞核中表达。根据染色细胞比例与染色程度进行评分：0分：<10%；1分：11%-50%；2分：>50%。0分：无染色；1分：淡黄色；2分：棕黄色；3分：黄褐色。两项评分相加，阴性(—)：<2分；弱阳性(+)：2-3分；强阳性(++)：4-5分，阳性率：(弱阳性数+强阳性)/总数×100%。

1.4统计学方法

2 结果

2.1RacGAP1与CyclinD1在胃癌组织中的表达

情况RacGAP1与Cyclin D1均主要表达在细胞核内，见图1。 RacGAP1与Cyclin D1在胃癌组织中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织(P<0.05)。见表1。

2.2RacGAP1及CyclinD1的表达与临床资料的关系RacGAP1在胃癌组织的表达与肿瘤病理T分期、淋巴结是否转移以及肿瘤部位有关(P<0.05)，而与性别、年龄、分化程度无关(P>0.05)；Cyclin D1在胃癌组织中的表达与肿瘤病理T分期、淋巴结是否转移有关(P<0.05)，而与性别、年龄、分化程度和肿瘤部位无关(P>0.05)。见表2。

2.3RacGAP1与CyclinD1在胃癌组织中表达的相关性174例胃癌标本中，77例RacGAP1与Cyclin D1均为阳性，33例RacGAP1与Cyclin D1均为阴性，RacGAP1与Cyclin D1表达呈正相关(r=0.708，P<0.05)，见表3。

图1400倍镜下RacGAP1与CyclinD1在胃癌组织中的表达情况(A：RacGAP1B：CyclinD1)

表1 RacGAP1与Cyclin D1在胃癌组织中的表达情况

注：与对照组相比，*P<0.05

表2 RacGAP1及Cyclin D1的表达与临床资料的关系

表3 RacGAP1与Cyclin D1在胃癌组织中表达的相关性

3 讨论

研究发现RacGAP1在肝癌、乳腺癌等组织中有过表达的情况[5，6]，Kin等人[7]的研究结果认为RacGAP1可能通过缩短细胞周期从而促进癌细胞的增殖，但具体机制尚不清楚。当细胞中Cyclin D1过表达时，RNA与蛋白质合成速度加快，细胞G1期时长显著缩短，迅速进入S期，从而促进细胞增殖[8]。罗枫等人[9]在结肠癌中、刘博[8]在食管癌中也发现存在Cyclin D1高表达的现象。本研究结果发现，Rac GTP酶活性蛋白-1在胃癌组织中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织(P<0.05)，Cyclin D1在胃癌组织中也呈高表达(P<0.05)，这与之前的研究结果相似[1]，这提示RacGAP1、Cyclin D1的表达可能与胃癌有关。应用Spearman等级相关分析法对RacGAP1与Cyclin D1在胃癌组织中表达的相关性进行检验，结果发现RacGAP1与Cyclin D1表达呈正相关(r=0.708，P<0.05)，推测在胃癌组织中，RacGAP1与Cyclin D1可能会相互促进，从而通过缩短细胞周期促进胃癌的发展。

RacGAP1与临床资料的关系表明RacGAP1在胃癌组织的表达与肿瘤病理T分期、淋巴结是否转移以及肿瘤部位有关(P<0.05)，而与性别、年龄、分化程度无关(P>0.05)，这提示RacGAP1与肿瘤的恶性程度有关。与Cyclin D1不同的是，胃窦/幽门处肿瘤组织中RacGAP1的阳性表达率显著高于胃底/贲门与胃体部肿瘤，这可能与幽门螺杆菌的感染有关。Lorès等人[10]发现RacGAP1可以通过重构细胞骨架、重排细胞极来改变细胞形态，使癌细胞与正常细胞粘附力降低，从而发生远处转移。Ke等人[11]也认为RacGAP1可以作为评价脑膜瘤患者预后不良的指标之一。Cyclin D1作为一种细胞周期的正性调控因子[12，13]，已被大量研究证实参与了胃癌的发生与发展，本文结果发现Cyclin D1在胃癌组织中的表达与肿瘤病理T分期、淋巴结是否转移有关(P<0.05)，而与性别、年龄、分化程度和肿瘤部位无关(P>0.05)。这进一步证实了Cyclin D1可以作为判断胃癌恶性程度的指标。

综上所述，RacGAP1与Cyclin D1在胃癌组织中呈高表达，二者可能在胃癌的发展过程中起到协同作用。

[1]路 明,刘恒昌,王 权,等.RacGAP1在胃癌中的表达与幽门螺杆菌L型感染的关系[J].临床荟萃,2016,31(1):48.

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[3]崔连艳,杨昭婷,倪卫东,等.SOX9在食管鳞癌中的表达及临床病理学意义[J].中国实验诊断学,2017,21(3):386.

[4]韩忠宝,于魏红,金美玉,等.腹腔镜胃癌根治术后不同营养方式对患者免疫功能的影响[J].中国实验诊断学,2015,19(6):1006.

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[6]Lawson CD,Fan C,Mitin N,et al.Rho GTPase Transcriptome Analysis Reveals Oncogenic Roles for Rho GTPase-Activating Proteins in Basal-like Breast Cancers.[J].Cancer Research,2016,76(13):3826.

[7]Kin ML,Fanny MT,Jenny TX,et al.Activation of GPR30 stimulates GTP-binding of Gαi1 protein to sustain activation of Erk1/2 in inhibition of prostate cancer cell growth and modulates metastatic properties[J].Experimental Cell Research,2017,350(1):199.

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[12]姚 楠,孙景秋,张 琼,等.肝细胞癌中Dkk-3与Cyclin D1的表达及临床意义[J].临床与实验病理学杂志,2017,33(2):158.

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*通讯作者

1007-4287(2017)12-2138-03

2016-05-13)