黄萍，叶冠男，刘伟

(长沙市第一医院，长沙410005)

结直肠癌组织Sox-2、β-catenin蛋白表达及其意义

黄萍，叶冠男，刘伟

(长沙市第一医院，长沙410005)

目的探讨Sox-2、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白在结直肠癌发生、发展中的作用。方法100例结直肠癌患者的肿瘤组织标本为癌组织，癌旁正常结直肠组织标本为癌旁组织。采用免疫组化法观察两种组织标本中Sox-2、β-catenin蛋白的表达情况。分析癌组织Sox-2和β-catenin蛋白表达与结直肠癌患者临床病理参数的关系。结果癌旁组织均未检测到Sox-2、β-catenin蛋白表达。癌组织Sox-2蛋白阳性表达67例(67.00%)，β-catenin蛋白阳性表达63例(63.00%)。癌组织Sox-2、β-catenin蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织(P均<0.05)。癌组织Sox-2阳性表达与临床分期、T分期和淋巴结转移有关(P均<0.05)；β-catenin阳性表达与临床分期、淋巴结转移和组织学分化程度有关(P均<0.05)。结论Sox-2、β-catenin蛋白表达升高可促进结直肠癌的发生及发展；检测结直肠癌组织中Sox-2、β-catenin蛋白表达情况有助于判断病情。

结直肠癌；Sox-2蛋白；β-连环蛋白

在欧美等发达国家，结直肠癌所导致的死亡病例位居所有恶性肿瘤的第二位[1]。近年来我国结直肠癌的发病率逐年递增，据统计每年约有25万新发病例，占全世界新发病例的18.6%[2]。结直肠癌的发病机制目前尚不清楚，大量研究表明其与遗传、不良生活习惯、饮食密切相关，流行病学资料表明早期结直肠癌患者5年生存率高于80%，而晚期结直肠癌患者5年生存率不到50%[3]。随着分子遗传学的不断发展，越来越多证据表明结直肠癌发病是一个多基因调控的过程，其中SOX基因家族B组成员转录产物Sox-2蛋白和β-连环蛋白(β-catenin)在其他肿瘤中发现表达上调[4]，但其在结直肠癌中的表达水平及相关性研究鲜有报道。本研究观察了结直肠癌组织中Sox-2、β-catenin蛋白的表达情况，现分析结果，探讨Sox-2、β-catenin在结直肠癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2013年6月～2016年6月于我院行手术治疗的100例结直肠癌患者，男62例、女38例，年龄45～81(66.3±16.2)岁。纳入标准：①术前未接受放疗或化疗；②病理诊断为结直肠癌；③患者一般资料齐全。排除合并其他肿瘤者。癌灶位于直肠35例，乙状结肠27例，升结肠24例，降结肠9例，横结肠5例。腺癌68例，黏液癌26例，印戒细胞癌6例。美国癌症联合委员会/国际抗癌联盟结直肠癌临床分期(2010年)Ⅰ期24例，Ⅱ期28例，Ⅲ期43例，Ⅳ期5例。肿瘤分化程度：低分化22例，中分化74例，高分化4例。

1.2 结直肠组织Sox-2、β-catenin蛋白表达 取100例患者手术切除的癌组织标本以及癌旁正常组织标本(距肿瘤组织边缘5 cm以上，且经病理证实)，用4%甲醛固定，清洗后用石蜡包埋，5 μm厚连续切片，在60 ℃恒温烤箱中烤1 h，室温冷却后标记备用。取一张切片进行HE染色，并由2名有经验的病理医师分别镜下检查切片，核实诊断。其余切片采用免疫组化SP法染色观察Sox-2、β-catenin蛋白表达情况。按试剂盒说明书操作。首先进行脱水处理，用3%过氧化氢灭活内源性酶，再用EDTA抗原修复液修复抗原，PBS冲洗后滴加BSA封闭液，孵育10 min后添加一抗，4 ℃冰箱孵育18 h，添加二抗室温孵育20 min，PBS冲洗2～3次，加二氨基联苯胺溶液显色10 min，苏木素复染30 s，梯度乙醇脱水，中性树胶封片，室温晾干，镜下观察。以PBS代替一抗为阴性对照，已知阳性切片为阳性对照。Sox-2阳性染色结果为细胞核有棕黄色颗粒。β-catenin阳性染色结果为细胞质有黄色颗粒。每张切片由2名病理医师采用双盲半定量积分法评定。①按细胞着色深浅程度评分：无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，红褐色为3分；②按阳性细胞所占比例评分，每张切片随机计数10个视野中的阳性细胞百分比，选择高倍镜(400×)视野，避开边缘组织。阳性细胞所占百分比<5%为0分，>5%～≤25%为1分，>25%～≤50%为2分，>50%为3分。上述2项得分相加得到综合评分，综合得分≥4分判定为阳性，否则为阴性。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。Sox-2、β-catenin蛋白阳性表达率组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

癌旁组织均未检测到Sox-2、β-catenin蛋白表达。癌组织Sox-2阳性表达67例(67.00%)，β-catenin蛋白阳性表达63例(63.00%)。癌组织Sox-2、β-catenin蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织(P均<0.05)。癌组织Sox-2、β-catenin表达与结直肠癌患者临床病理参数的关系见表1。癌组织Sox-2阳性表达与结直肠癌临床分期、T分期和淋巴结转移有关(P均<0.05)，与性别、年龄、肿瘤部位、分化程度无关(P均>0.05)。癌组织β-catenin阳性表达与结直肠癌临床分期、淋巴结转移和分化程度有关(P均<0.05)，与性别、年龄、肿瘤部位、T分期无关(P均>0.05)。

表1 结直肠癌组织Sox-2、β-catenin表达与患者临床病理参数的关系(例)

3 讨论

SOX基因是一类与发育相关的基因，最早发现于小鼠Y染色体上，因为编码睾丸决定因子而被称为Y染色体性别决定带(SRY)，随后在其他动物基因组中发现其同源基因，均具有共同的保守序列HMG-box，因而被命名为SRY相关HMG-box(SOX)[5～7]。目前认为SOX基因的作用包括参与胚胎早期发育、参与神经发育、参与晶状体发育。Sox-2是SOX基因家族中的一员，近年来国内外研究发现，SOX基因家族成员在胃癌、乳腺癌、前列腺癌等[8]多种肿瘤组织中异常表达。本研究结果发现SOX基因其编码产物Sox-2蛋白在结直肠癌组织中高表达，而在邻近的正常结直肠组织中不表达，表明其参与了结直肠癌的发生、发展过程。本研究还发现结直肠癌组织中Sox-2阳性表达与结直肠癌临床分期、浸润深度和淋巴结转移有关，表明其与结直肠癌的临床分期和转移能力相关，检测结直肠癌组织Sox-2表达有助于判断患者病情。体外细胞实验也发现，Sox-2在正常的永生化细胞系中不表达，仅在具有转移潜力的肿瘤细胞系中表达[9]，据此认为Sox-2高表达可能与肿瘤的分化、侵袭能力有关。此外还有研究发现，Sox-2表达与Ki-67基因呈正相关[10]，而后者被认为是检测肿瘤细胞增殖活性的可靠指标，表明Sox-2与肿瘤的增殖、分化能力密切相关。

本研究在结直肠癌组织中同时发现了Sox-2蛋白和β-catenin蛋白阳性表达。β-catenin蛋白是Wnt信号通路的关键蛋白[11]，正常细胞中该信号通路处于关闭状态，β-catenin与细胞膜上的E-钙连蛋白结合而不发挥作用，信号通路激活后E-钙连蛋白与β-catenin分离并重新在细胞膜上分布，使细胞间黏附能力减弱[12]。本研究也发现，结直肠癌组织β-catenin表达与肿瘤淋巴结转移和组织学分化程度有关，证实其与肿瘤的黏附能力有关。β-catenin蛋白在胞质中异常积累，转移到细胞核中，进而激活Wnt通路中与肿瘤发生相关的基因，其中就包括SOX家族中的一些成员。已有研究表明，Sox-4基因编码产物能够稳定结合β-catenin，使其在核内异常聚集，维持Wnt信号通路的激活状态[13～15]。本研究结果也侧面提示，Sox-2基因也可能参与了Wnt信号通路的调控，并与其一起共同参与结直肠癌的发生、发展。

综上所述， Sox-2、β-catenin高表达共同参与了结直肠癌的发生、发展过程。检测结直肠癌组织中Sox-2、β-catenin蛋白表达情况有助于判断病情。

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B

1002-266X(2017)40-0058-03

2017-04-26)