高洁，李日著，朱名毅，蒙山，王居平,3

(1右江民族医学院，广西百色533000；2右江民族医学院附属医院；3汕头大学医学院)

食管鳞癌组织MTA2、突变型p53蛋白表达变化及意义

高洁1，李日著2，朱名毅1，蒙山1，王居平1,3

(1右江民族医学院，广西百色533000；2右江民族医学院附属医院；3汕头大学医学院)

目的观察食管鳞癌组织肿瘤转移相关基因2(MTA2)、突变型p53蛋白表达变化，并探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学染色法检测80例份食管鳞癌组织(观察组)和30例份正常食管组织(对照组)中MTA2、突变型p53蛋白表达情况，分析食管鳞癌组织MTA2、突变型p53蛋白表达与食管鳞癌患者临床病理参数的关系。结果观察组MTA2阳性表达率为85.0%(68/80)，突变型p53阳性表达率为61.3%(49/80)，对照组MTA2、突变型p53蛋白均无阳性表达。食管鳞癌组织MTA2蛋白阳性表达与癌组织浸润深度、远处转移、淋巴结转移、肿瘤组织分化程度、TNM分期有关(P均<0.05)；突变型p53蛋白阳性表达与癌组织浸润深度、淋巴结转移、远处转移有关(P均<0.05)。观察组食管癌组织MTA2、突变型p53蛋白表达均为阳性表达的有46例份，食管鳞癌组织中MTA2表达与突变型p53表达呈正相关(r=0.313,P<0.01)。结论食管鳞癌组织中MTA2、突变型p53蛋白阳性表达增多。检测MTA2、突变型p53表达有助于判断食管鳞癌浸润和转移能力。

食管鳞癌；肿瘤转移相关基因 2蛋白；突变型p53蛋白；肿瘤浸润；肿瘤转移

肿瘤转移相关基因 2(MTA2)在组织中的过度表达被证实与非小细胞肺癌[1]、胃癌[2]等有着密切联系，且与肿瘤组织分化程度、TNM分期及淋巴结转移等明显相关。MTA2与突变型p53 结合后可以降低突变型p53 的乙酰化水平，与肿瘤的浸润及转移密切相关[3]。目前国内外对食管鳞癌中MTA2、突变型p53表达变化的研究报道较少。本研究观察了食管鳞癌组织MTA2、突变型p53蛋白表达变化，分析食管鳞癌组织MTA2、突变型p53蛋白表达与食管鳞癌患者临床病理参数的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取右江民族医学院附属医院2013～2016年手术切除的80例桂西地区食管鳞癌患者肿瘤组织存档蜡块(观察组)。所有患者临床病理资料完整，术前未进行任何针对肿瘤的特殊治疗。按照美国癌症联合委员会食管癌 TNM 分期标准进行分期[4]：Ⅰ期 12 例，Ⅱ期30例，Ⅲ期26例，Ⅳ期12例；病理类型为溃疡型15例， 髓质型28例，缩窄型12例，覃伞型25例；肿瘤组织分化程度为高分化20例，中分化32例，低分化28例；浸润未超过肌层35例，浸润到肌层或浆膜层45例；有淋巴结转移者38例，无淋巴结转移者42例；有远处转移者25例，无远处转移者55例。另取30例胃镜检查活检标本中的正常食管黏膜组织标本作为对照组。所有标本由两位有经验的病理医师诊断。

1.2 MTA2、突变型p53蛋白表达检测 采用免疫组化法。将标本置于新鲜的二甲苯中脱蜡，用不同浓度的乙醇水化，放入装有抗原修复液(pH值6.0的柠檬酸盐缓冲液)的高压锅中进行抗原修复15 min，冷却至室温。将抗原修复后的切片用蒸馏水冲洗1 min，用油笔圈定玻片上的待测组织区域，PBS冲洗3 min×2次，除去PBS，在油笔圈定的区域内滴加内源性过氧化物阻断剂，室温下孵育10 min，PBS冲洗3 min×3次，除去PBS溶液，MTA2 抗体(1∶500)/p53抗体覆盖切片，以PBS代替一抗为阴性对照，放入4 ℃冰箱过夜。第二天用PBS冲洗2 min×3次，滴加相应二抗，室温下孵育15 min；PBS冲洗2 min×2次，加入新鲜配制的DAB显色液，室温下孵育4 min；苏木素复染细胞核30 s，自来水冲洗，PBS冲洗返蓝，快速脱水，二甲苯透明，用中性环保树胶和盖玻片封片，晾干后在光学显微镜下观察拍照。

MTA2、突变型p53阳性表达主要位于食管鳞癌细胞核中，以肿瘤细胞的细胞核中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色，突变型p53少量在细胞质中表达。每张切片随机观察10个视野(×40)，采用双评分法进行判定[5]。细胞染色程度评分标准：不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞在观察视野中所占比例评分标准：阳性细胞数小于5%为0分，5%～<25%为1分，25%～<50%为2分，50%～<75%为3分，大于75%为4分；二者乘积≤1为阴性，否则为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。组间比较采用χ2检验。相关性分析采用Spearman等级相关性检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

观察组MTA2阳性表达率为85.0%(68/80)，突变型p53阳性表达率为61.3%(49/80)，对照组MTA2、突变型p53蛋白均无阳性表达。食管鳞癌组织MTA2、突变型p53蛋白阳性表达与癌患者临床病理参数的关系见表1。食管鳞癌组织MTA2阳性表达与癌组织浸润深度、远处转移、淋巴结转移、肿瘤组织分化程度、TNM分期密切相关(P均<0.05)，与肿瘤病理类型、患者年龄无关(P均>0.05)。食管鳞癌组织突变型p53阳性表达与食管鳞癌组织浸润深度、远处转移、淋巴结转移有关(P均<0.05)，与患者年龄、肿瘤组织分化程度、病理类型、TNM分期无关(P均>0.05)。观察组食管鳞癌组织MTA2、突变型p53蛋白均为阳性表达者46例份，食管鳞癌组织中MTA2表达与突变型p53表达呈正相关(r=0.313,P<0.01)。

表1 食管鳞癌组织MTA2、突变型p53蛋白阳性表达与患者临床病理参数的关系(例)

3 讨论

本研究结果显示，MTA2蛋白在食管鳞癌组织中的阳性表达率为85%，而在正常食管黏膜组织中阴性表达，且MTA2的阳性表达多集中在血管周围和肿瘤边缘，这与MTA2在结直肠癌中的表达类似[6]。Zhang等[7]研究发现，MTA2蛋白参与组成具有核小体重塑活性的组蛋白去乙酰基酶(NuRD)的亚基。人MTA2基因位于染色体11q1213.1，主要在细胞核内表达。相关研究表明，MTA2可以通过影响核染色质的重塑来调控基因转录过程，并通过调节细胞凋亡、细胞骨架和雌激素通路等途径促进肿瘤的浸润和转移[8]。有研究发现，在卵巢癌和非小细胞肺癌中，低分化组MTA2蛋白阳性表达率高于中高分化组，有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，临床分期Ⅲ/Ⅳ期组高于Ⅰ/Ⅱ期组[9]。Peneil等[9]通过检测卵巢癌细胞株中MTA2的表达结果验证了上述结论。由此证明MTA2蛋白表达与淋巴结转移、组织分化程度及肿瘤的临床分期密切相关。国外研究发现，MTA2表达与食管癌淋巴结转移数目及淋巴结转移率均呈正相关[10]。本研究结果也证明了MTA2阳性表达在低分化肿瘤、浸润到达肌层/浆膜层、有远处转移及淋巴结转移、Ⅳ期食管鳞癌组织中明显增高，提示MTA2蛋白在食管鳞癌的浸润、转移中发挥着重要作用。

p53是与人类恶性肿瘤相关性最高的基因，约有一半以上的肿瘤带有p53突变，其可分为野生型和突变型。突变型p53破坏正常细胞的代谢平衡，诱发正常细胞转化为癌细胞，癌细胞持续的失衡增殖，加速组织癌变，丧失了野生型p53原有的抑癌功能[11]。本研究结果显示突变型p53在食管鳞癌组织中阳性表达率为61.3%，在正常食管黏膜组织中为阳性表达，且食管鳞癌组织突变型p53阳性表达水平与食管鳞癌浸润深度、远处转移、淋巴结转移相关，与文献[12]报道相类似。Luo等[13]研究发现，有MTA2成分的组蛋白去乙酰化酶1复合体(HDAC1)能够抑制p53蛋白，通过使p53蛋白脱去乙酰基，从而抑制依赖突变型p53蛋白的基因转录激活，最终使细胞增长受抑制、诱导细胞凋亡。

本研究结果显示，食管鳞癌组织MTA2表达与突变型p53表达呈正相关，说明二者在食管鳞癌发生、发展、转移中存在一定的联系。考虑到食管鳞癌组织MTA2蛋白阳性表达与癌组织浸润深度、远处转移、淋巴结转移、肿瘤组织分化程度、TNM分期有关，突变型p53蛋白阳性表达与癌组织浸润深度、淋巴结转移、远处转移有关，我们认为检测MTA2、突变型p53表达有助于判断食管鳞癌浸润和转移能力。

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国际自然科学基金资助项目(81760513)；广西高校中青年教师基础能力提升项目(KY2016YB339，2017KY0520)；广东省科技计划项目(2014A020212288)；广西高等学校重点实验室科学研究开放课题(gxzdsysyy2015208)；右江民族医学院2014年度校级科研项目[右医科字(2014)2号]；百色市科学研究与技术开发计划项目(百科计20141106)；右江民族医学院校级科研项目(yy2016bsky02)。

王居平(E-mail: juping0128@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.40.016

R735.1

B

1002-266X(2017)40-0055-03

2017-07-04)