李丽坤 邸雅南 彭德银 赵煜弘

北京航天总医院消化内科1(100076) 北京空军指挥学院门诊部2

·短篇论著·

HER2在结直肠癌中的表达及其与预后的关系

李丽坤1*邸雅南1彭德银1赵煜弘2

北京航天总医院消化内科1(100076)北京空军指挥学院门诊部2

HER2； 基因表达； 结直肠肿瘤； 预后

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是常见的消化系统恶性肿瘤，目前其发病率和病死率在世界范围内均居恶性肿瘤前列[1]。近年来，随着国人饮食结构和生活方式的改变，我国CRC发病率呈逐年上升趋势，5年生存率极低，对患者生活质量和生命健康构成极大威胁。研究证实，CRC的高度侵袭性和转移性是其高病死率的主要原因[2]。人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)属于表皮生长因子受体家族，其编码基因是一种重要的原癌基因。研究显示，HER2在多种恶性肿瘤中高表达，可抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤新生血管形成，进而增强肿瘤的侵袭性和转移性[3]，已被证实为胃癌、前列腺癌、乳腺癌、胆囊腺癌等恶性肿瘤的预后不良指标之一[4-6]。目前关于HER2在CRC中表达的研究较多，普遍认为其在CRC中呈高表达，与肿瘤生物学行为和预后有一定相关性[3-4,7]，但亦有研究认为HER2表达与CRC临床病理特征和(或)患者预后无关[2,8-10]。本研究通过检测HER2在CRC中的表达，分析其与CRC临床病理特征和预后的关系，旨在为CRC的诊断、治疗和预后评估提供依据。

对象与方法

一、研究对象

连续收集2010年2月—2011年2月北京航天总医院收治的CRC患者118例，其中男性67例，女性51例，年龄 26～81岁，平均(56.3±17.2)岁。纳入标准：①接受CRC根治性手术治疗；②术后病理证实为原发性CRC；③术后接受放、化疗；④临床病理资料完整；⑤患者签署知情同意书。排除标准：①复发性CRC；②合并其他类型原发性恶性肿瘤；③合并严重血液、免疫、内分泌系统以及心脑血管、肝、肾、肺等器官组织疾病；④术后30 d内发生严重并发症或死亡。研究方案经医院伦理委员会审核批准。

二、方法

1.HER2免疫组化染色：CRC手术标本4%中性甲醛溶液固定，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，4 μm厚度连续切片。石蜡切片脱蜡至水，3% H2O2封闭内源性过氧化物酶，微波高温抗原修复，正常山羊血清封闭。滴加HER2一抗(Bio-Rad公司，工作浓度1∶500)，4 ℃孵育过夜，滴加生物素化二抗(Bio-Rad公司，工作浓度1∶5 000)，室温孵育10 min，滴加HRP标记的链霉亲和素，DAB显色，苏木精复染，脱水，透明，封片，光学显微镜下观察。

结果判定：每张切片随机选取5个200倍视野，观察阳性细胞及其染色强度。根据美国临床肿瘤学会相关指南将HER2表达强度分为4个等级：<10%的细胞膜有着色或轻微染色，(-)；10%～19%的细胞出现不连续的细胞膜染色，(+)；20%～30%的细胞膜出现完整染色但着色较弱，(++)；>30%的细胞膜出现完整染色且着色较强，(+++)。表达强度(-)判定为表达阴性，(+)判定为低表达，(++)和(+++)判定为高表达。所有标本均由2名资深病理科医师共同诊断。

2.术后随访：所有患者术后均以电话或门诊复查形式进行随访，以确诊当日作为随访起点，随访截止日期为2016年2月28日。

三、统计学分析

应用SPSS 17.0统计学软件，计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验，预后影响因素的分析采用Cox比例风险模型。P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、HER2表达及其与CRC临床病理特征的关系

免疫组化染色显示，118例CRC患者中41例(34.7%)癌组织HER2表达阳性，其中高表达18例(15.3%)，低表达23例(19.5%)，77例(65.3%)HER2表达阴性。分析发现HER2表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈显著正相关(P<0.05)，与性别、发病年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、分化程度无明显相关性(P>0.05)(表1)。

二、HER2表达与CRC预后的关系

至随访截止日，共38例患者死亡，12例患者失访，随访率为89.8%(106/118)。106例纳入分析的患者中11例HER2高表达，23例低表达，72例表达阴性，随访期内3组死亡率分别为63.6%(7/11)、43.5(10/23)和29.2%(21/72)，HER2高表达者高于低表达和表达阴性者，低表达者高于表达阴性者，差异均有统计学意义(P<0.05)。Cox多因素分析显示，肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和HER2是患者预后的独立影响因素(P<0.05)(表2)。

表1 HER2表达与CRC临床病理特征的关系n(%)

表2 CRC患者预后影响因素的多因素分析(Cox比例风险模型)

变量BSEP值RR95%CI浸润深度0．8720．1250．0431．2311．201～1．743淋巴结转移1．8420．1130．0271．5271．033～1．905TNM分期0．5760．1090．0311．4901．071～2．139HER20．4240．2160．0062．1341．172～2．415

讨 论

HER2基因定位于17号染色体，主要编码HER2蛋白。HER2蛋白是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，在细胞增殖、分化、血管生成等过程中发挥重要作用，其过表达可加速细胞分裂，使其增殖、分化过程失衡，最终转变为癌细胞[11]。HER2高表达通常只出现于胎儿期，正常人体组织中其表达量极低，但可在某些体内、外因素的作用下被激活，出现表达上调。近年研究发现多种腺癌(包括乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、卵巢癌)中存在HER2基因扩增及其蛋白表达增加，可作为肿瘤预后评估指标[4-6]。HER2在乳腺癌和胃癌中的研究最为成熟，研究表明乳腺癌发病与HER2过表达有关，HER2表达水平与患者预后显著相关[12]。

目前关于HER2表达与CRC临床病理特征和预后关系的研究报道众多，但结果存在分歧。多数研究[3,7]显示CRC组织中的HER2表达水平显著高于正常结直肠组织，且与术后生存率呈负相关。HER2过表达导致酪氨酸激酶活性增强，而酪氨酸磷酸化可激活多种细胞内信号转导通路，如PI3K/Akt、Ras/MAPK等，从而促进细胞增殖，抑制细胞凋亡[13-14]。此外，有研究发现HER2高表达可增加肿瘤细胞的迁移率、体外侵袭率和Ⅳ型胶原酶活性，且可干扰黏附分子合成，从而促进肿瘤侵袭、转移和复发[15]。体外研究显示，以RNA干扰技术下调结肠癌细胞中的HER2表达，可明显抑制细胞增殖[16]。然而亦有研究发现CRC中的HER2表达未见明显增加，且其表达与肿瘤临床病理特征和(或)患者预后无明显相关性[2,8-10]，推测可能与患者曾接受放、化疗以及检测方法、结果判定标准不同等因素有关。本研究中CRC患者癌组织HER2表达阳性率为34.7%，且其表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈显著正相关；在术后随访期内，HER2表达阴性、低表达和高表达患者的死亡率依次增高；HER2表达是影响患者预后的独立危险因素。

综上所述，CRC中的HER2表达与肿瘤临床分期和患者预后有关，因此其检测具有重要临床意义，有望成为CRC预后评估的生物学标记物。HER2在CRC中的具体调控机制有待后续进一步研究探讨。

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(2017-03-09收稿；2017-04-14修回)

ExpressionofHER2inColorectalCanceranditsCorrelationWithPrognosis

LILikun1,DIYanan1,PENGDeyin1,ZHAOYuhong2.

1DepartmentofGastroenterology,BeijingAerospaceGeneralHospital,Beijing(100076);2AirForceCommandCollegeClinics,Beijing

HER2; Gene Expression; Colorectal Neoplasms; Prognosis

10.3969/j.issn.1008-7125.2017.10.008

*Email:lilikun63@163.com

背景：结直肠癌(CRC)是常见的消化系统恶性肿瘤，具有高度侵袭性和转移性，病死率高。人表皮生长因子受体2(HER2)在多种肿瘤中存在高表达，可抑制肿瘤细胞凋亡，是肿瘤预后不良的指标之一。目的研究CRC组织中的HER2表达及其与肿瘤临床病理特征和预后的关系。方法连续收集2010年2月─2011年2月北京航天总医院118例CRC患者，采用免疫组化染色检测癌组织HER2表达水平，分析其表达与肿瘤临床病理参数和患者预后的关系。结果CRC组织中HER2表达阳性率为34.7%(41/118)，其中高表达18例(15.3%)，低表达23例(19.5%)。HER2表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P<0.05)。HER2表达阴性、低表达、高表达患者随访期内死亡率依次增高，组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Cox比例风险模型分析显示HER2是CRC患者预后的独立影响因素(RR=2.134,95% CI:1.172～2.415,P=0.006)。结论HER2高表达与CRC临床分期和患者预后有关，有望成为CRC预后评估的生物学标记物。

Background:Colorectal cancer (CRC) is a common malignant tumor in digestive system with high invasive and metastatic properties and has a high mortality rate.Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) is highly expressed in a variety of tumors and can inhibit tumor cell apoptosis.It is an indicator of poor prognosis in some malignancies.AimsTo study the expression of HER2 and its correlation with clinicopathological characteristics and prognosis of CRC.MethodsA total of 118 patients with CRC admitted from Feb.2010 to Feb.2011 consecutively at the Beijing Aerospace General Hospital were recruited.Expression level of HER2 protein in CRC tissue was determined immunohistochemically and its correlations with clinicopathological parameters and prognosis of CRC were analyzed.ResultsImmunohisto-chemically,positive staining for HER2 was found in 41 cases of the CRC tissues (34.7%),of which 18 (15.3%) were strongly positive and 23 (19.5%) were weakly positive.There were significant correlations between HER2 expression and depth of invasion,lymph node metastasis and TNM staging of CRC (P<0.05).Follow-up study revealed that the mortality rate increased with the increase of intensity of HER2 staining (P<0.05).Cox proportional hazard model confirmed that HER2 was an independent prognostic factor in CRC patients (RR=2.134,95% CI:1.172-2.415,P=0.006).ConclusionsHigh expression of HER2 is correlated with clinical staging and prognosis of CRC,and might be used as a biomarker for prediction of prognosis in CRC patients.