于芳，金蕊，黄君健

军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100850

核糖核酸酶A在端粒免疫荧光原位杂交实验中的应用

于芳，金蕊，黄君健

军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100850

目的：在端粒免疫荧光原位杂交实验中，降低核仁着色对端粒图像清晰度的影响。方法：分别将0.1、0.2、0.4 mg/mL的核糖核酸酶（RNase）A与待检标本于37℃消化过夜，然后进行端粒原位杂交实验。结果：0.4 mg/mL RNase A可以消除HepG2细胞端粒原位杂交时的非特异结合，使用HeLa、293T和U2OS细胞也有同样效果。结论：在进行端粒原位杂交实验时，用0.4 mg/mL RNase A消化核仁可减少探针的非特异结合，提高端粒图像的清晰度。

核糖核酸酶A；免疫荧光原位杂交（IF-FISH）；端粒

端粒是真核细胞线性染色体末端DNA重复序列（TTAGGG），在维护基因组稳定性和细胞生理内稳态中起重要作用[1]。研究发现端粒功能调控与各种疾病的发生密切相关，因此研究端粒DNA-蛋白质复合物的功能至关重要[2]。在敲低端粒相关蛋白后需要检测该蛋白的端粒定位情况，实验中最常用到荧光原位杂交技术（fluores⁃cencein situhybridization，FISH）。该技术是20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术[3-4]，基本原理是先把DNA（或RNA）探针用特殊的荧光染料标记，然后将探针直接杂交到染色体上，通过荧光染料发出的荧光进行DNA序列在染色体上的定位、定性、相对定量分析。我们使用该技术标记细胞中的端粒，在操作过程中，所用探针较短，长度一般为15 bp，且具有良好的穿透性，可用于标记端粒；但同时探针在杂交过程中特异性较弱，会与核仁发生非特异性结合，即除端粒结合外还有核仁的着色，影响实验结果。……