张峥嵘，王嫚娜，梁剑青，李世崇，黄红艳，闫敏，陈昭烈，刘真真，孙强

1.郑州大学 附属肿瘤医院乳腺科，河南 郑州 450008；2.军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071；3.首都医科大学 附属北京世纪坛医院肿瘤内科，肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室，北京 100038

CD19蛋白截短体慢病毒表达载体的构建及其在K562细胞中的表达

张峥嵘1，2，王嫚娜2，梁剑青2，李世崇2，黄红艳3，闫敏1，陈昭烈2，刘真真1，孙强2

1.郑州大学 附属肿瘤医院乳腺科，河南 郑州 450008；2.军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071；3.首都医科大学 附属北京世纪坛医院肿瘤内科，肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室，北京 100038

目的：构建胞内段缺失的CD19蛋白截短体（CD19t）慢病毒表达载体pLVX-EF1α-CD19t-IRES-Puro，并建立稳定表达CD19t的人红白血病细胞系K562/CD19t。方法：合成CD19t基因全长，酶切产物插入慢病毒载体pLVXEF1α-IRES-Puro，将重组质粒转染293FT细胞包装病毒后感染人红白血病细胞系K562，采用Western印迹和免疫荧光技术检测CD19t在K562细胞中的表达，并通过ELISA检测K562/CD19t与CD19 CAR-Jurkat共培养上清中的IL-2浓度。结果：酶切鉴定与测序结果表明成功构建慢病毒表达载体pLVX-EF1α-CD19t-IRES-Puro；Western印迹和免疫荧光检测到K562/CD19t细胞中CD19t的表达；ELISA结果显示表达的CD19t能够刺激识别CD19的CAR-Jurkat细胞分泌IL-2。结论：构建了CD19蛋白截短体慢病毒表达载体，并在K562细胞中表达,有助于进一步构建B细胞白血病动物模型和验证CAR-T效能。

CD19；基因克隆；B细胞；CAR-T免疫疗法

CD19分子，又名Leu-12或B4，最早于1983年被Naderl等发现[1]。CD19基因位于第16条染色体短臂16p11.2，由15个外显子组成，编码556个氨基酸残基[2]。CD19表达于正常成熟B细胞、恶性B细胞和B前体细胞，在成熟B细胞中的表达量约是未成熟B细胞中的3倍[3-4]。……