张峥嵘，郑幽，阮班展，王嫚娜，梁剑青，李世崇，黄红艳，闫敏，陈昭烈，刘真真，孙强

1.郑州大学附属肿瘤医院 乳腺科，河南 郑州 450008；2.军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071；3.首都医科大学附属北京世纪坛医院 肿瘤内科，肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室，北京 100038

RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中的表达定位

张峥嵘1，2，郑幽2，阮班展2，王嫚娜2，梁剑青2，李世崇2，黄红艳3，闫敏1，陈昭烈2，刘真真1，孙强2

1.郑州大学附属肿瘤医院 乳腺科，河南 郑州 450008；2.军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071；3.首都医科大学附属北京世纪坛医院 肿瘤内科，肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室，北京 100038

目的：构建RRAGD-EGFP融合基因表达载体pQCXIP-RRAGD-EGFP，并检测RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中的表达定位。方法：提取HEK293细胞总RNA，逆转录得到cDNA并扩增RRAGD基因，克隆入逆转录载体pQCXIP-EGFP-N1，病毒包装后感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-436，活细胞观察其在细胞内的表达定位。结果：构建获得逆转录病毒载体pQCXIP-RRAGD-EGFP，融合蛋白RRAGD-EGFP定位于胞浆囊泡和细胞核。结论：RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中表达定位于胞浆囊泡，与其参与溶酶体调节功能一致，为后续分析RRAGD在cell-in-cell中的作用奠定了基础。

Ras相关GTP结合蛋白D（RRAGD）；基因克隆；cell-in-cell

Ras相关GTP结合蛋白D（Ras-related GTP binding protein D，RRAGD）由400个氨基酸残基组成，相对分子质量为45 588。RRAGD基因位于染色体6q15，编码区长1200 bp[1]。

RRAGD是GTR/RAG GTP结合蛋白家族的一员，哺乳动物体内的该家族成员还包括RRAGA、RRAGB、RRAGC[2-3]。这4种蛋白在结构上均有能与GTP/GDP结合的Loop环和异二聚化结构域，从而决定了其在功能上具有小G蛋白活性和异二聚化的能力。因此，它们作为一个分子开关参与生物过程[4]。……