贾俐莉，王小利，杨怡姝，沈思嗣，曾毅

北京工业大学 生命科学与生物工程学院，北京 100124

实时定量检测NF-κB p65亚基核易位方法的建立

贾俐莉，王小利，杨怡姝，沈思嗣，曾毅

北京工业大学 生命科学与生物工程学院，北京 100124

目的：建立可直观检测NF-κB p65亚基核易位的方法。方法：构建NF-κB p65的真核表达重组质粒pEG⁃FP-p65，转染HeLa细胞，加入肿瘤坏死因子α（TNF-α）后采用活细胞成像技术观察绿色荧光蛋白在HeLa细胞内的变化。结果：TNF-α处理后0～2 h，EGFP-p65融合蛋白主要聚集在胞浆处；TNF-α处理后4～12 h，随处理时间的延长，细胞核处的绿色荧光蛋白逐渐增强，但细胞内总荧光值基本保持稳定。结论：TNF-α可以促进EGFP-p65入核。活细胞成像技术具有操作简单、实时动态、直观、定量等优点，可用于探讨人类免疫缺陷病毒（HIV）潜伏感染再激活剂的作用机制。

NF-κB；肿瘤坏死因子α；活细胞成像；核易位

人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）在体内的潜伏感染是无法治愈艾滋病的重要原因[1-2]。HIV-1原病毒的整合位置、表观调控、RNA聚合酶起始复合体的形成、反式激活因子的作用等环节参与了HIV-1潜伏感染的建立与再激活过程。采用蛋白激酶C（protein ki⁃nase C，PKC）激活剂活化 NF-κB通路再激活HIV-1潜伏感染，是当前“激活再杀伤（shock and kill）”治疗策略的一个研究方向[2-4]。

NF-κB是细胞核内重要的转录因子，HIV-1长末端重复序列（long terminal repeat，LTR）中存在2个NF-κB结合位点。各种刺激因子诱导NF-κB易位至细胞核，可有效激活HIV-1[5]。TNF-α可以活化NF-κB[6]，本课题组前期研究显示，2.5 ng/mL TNF-α对HIV潜伏感染模型J-Lat 11.1有明显的再激活作用，再激活率达51.78%。在此，我们拟采用活细胞成像技术观察TNF-α对NF-κB p65的核易位作用，并探讨该方法在HIV-1潜伏感染再激活剂作用机制研究中的应用价值。……