章晟，庄璐，李秋平，宋婕，张玉佩，朱丽敏，赵丹华，王瑞娟，封志纯

陆军总医院 附属八一儿童医院；出生缺陷防控关键技术国家工程实验室；儿童器官功能衰竭北京市重点实验室；北京 100007

实时定量PCR检测新生儿全血中肺炎克雷伯菌方法的建立和应用

章晟，庄璐，李秋平，宋婕，张玉佩，朱丽敏，赵丹华，王瑞娟，封志纯

陆军总医院 附属八一儿童医院；出生缺陷防控关键技术国家工程实验室；儿童器官功能衰竭北京市重点实验室；北京 100007

目的：建立实时定量PCR（RQ-PCR）快速检测新生儿血液标本中肺炎克雷伯菌基因组DNA的方法，并进行初步临床应用。方法：选择肺炎克雷伯菌高度保守的二鸟苷酸环化酶基因作为靶基因，设计特异性引物和TaqMan探针，建立RQ-PCR反应体系；采用含靶基因扩增片段的重组质粒建立标准曲线，提取血液中的基因组DNA，对500份新生儿血液标本进行RQ-PCR检测。结果：设计的引物和探针特异性高，检测限为1个拷贝数；500份新生儿血液标本中，RQ-PCR检测为阳性的有18个病例，阳性率为3.6%，明显高于血培养的阳性率2.4%（12个病例），差异具有统计学意义（P＜0.01）。结论：RQ-PCR可用于检测新生儿血液标本中的肺炎克雷伯菌，此方法快速、灵敏、特异性强。

实时定量PCR；新生儿；肺炎克雷伯菌；血标本

新生儿重症监护病房收治出生小于28 d的新生儿，包括（极）早产儿、极（超）低出生体质量儿、足月重症新生儿等病情严重的患儿，新生儿本身刚脱离子宫内环境骤然转变至宫外，对外界适应性差，自身免疫系统不够完善，加上患儿病情较重、住院时间长，并且经常进行侵入性操作，极易并发院内感染，往往导致患儿病情加重，甚至是死亡[1-3]。……