冯丽丽，陈海燕，刘毓侠，郭彦，周国利，任银玲

1.河南省农业科学院 农业经济与信息研究所，河南 郑州 450002；2.聊城大学 生命科学学院，山东 聊城 252059

可溶性泛素样特异性蛋白酶1的表达及活性鉴定

冯丽丽1，陈海燕1，刘毓侠1，郭彦2，周国利2，任银玲1

1.河南省农业科学院 农业经济与信息研究所，河南 郑州 450002；2.聊城大学 生命科学学院，山东 聊城 252059

目的：高效可溶性表达泛素样特异性蛋白酶1（ULP1）。方法：根据大肠杆菌密码子的偏好性优化合成编码ULP1的基因片段序列，将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中，转化大肠杆菌BL21（DE3），用0.5 mmol/L IPTG于37℃诱导表达8 h，观察重组蛋白ULP1的表达情况；优化诱导时间及IPTG浓度，并鉴定重组蛋白ULP1的生物学活性。结果：重组蛋白ULP1表达的最佳条件为37℃、0.1 mmol/L的IPTG诱导表达5 h，目的蛋白以可溶性表达为主；Western印迹结果表明，重组蛋白ULP1能够被His单克隆抗体识别，重组蛋白ULP1能够特异性酶切SUMO-GFP。结论：表达了具有生物学活性的SUMO蛋白酶ULP1。

泛素样特异性蛋白酶1（ULP1）；SUMO蛋白酶；表达；纯化；生物学活性

泛素样特异性蛋白酶（ubiquitin-like specific protease，ULP）为半胱氨酸蛋白酶超家族成员，在真核生物体内可将小分子泛素样修饰物（small ubiquitin-related modifier，SUMO）底物蛋白偶合物水解成SUMO和底物，此过程称为去SUMO化（de⁃sumoylation）[1-4]。酿酒酵母中含有2种SUMO蛋白酶，即ULP1和ULP2。ULP1位于核孔复合体中，ULP2则主要位于细胞核内。目前对ULP1的研究较多。ULP1由621个氨基酸残基组成，至少含有2个结构域，C端蛋白酶折叠区域（432～621 aa）保守性高，N端结构域（1～432 aa）保守性弱，其中第403～621 aa片段具有全长ULP1的酶切活性，且可水解以α氨基连接的SUMO蛋白[5-6]。

SUMO蛋白广泛存在于真核细胞中，具有重要的生物学功能，参与多种生命过程[7]。……