张丽娜，黄映辉

北京工业大学 生命科学与生物工程学院，北京 100124

人G3BP1真核表达载体的构建及其在食管癌细胞中的定位分析

张丽娜，黄映辉

北京工业大学 生命科学与生物工程学院，北京 100124

目的：构建GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1（G3BP1）的真核表达载体pEGFP-C3-G3BP1，并观察其在人食管癌EC109细胞中的表达及定位。方法：采用RT-PCR法从EC109细胞中扩增G3BP1 cDNA全长序列，用限制性内切酶HindⅢ和BamHⅠ双酶切PCR产物后克隆至pEGFP-C3载体，转化大肠杆菌DH5α后，挑取阳性克隆提取质粒，经双酶切及测序鉴定；将重组质粒用脂质体法转染EC109细胞，荧光定量RT-PCR和Western印迹检测G3BP1的表达，荧光显微镜观察G3BP1的定位。结果：目的基因G3BP1的序列完全正确，并在EC109细胞中获得表达，荧光显微镜观察显示G3BP1定位于细胞质。结论：构建了pEGFP-C3-G3BP1真核表达载体，并在EC109细胞中过表达，G3BP1蛋白定位于细胞质，形成应激颗粒（stress granules，SGs）。为进一步探讨G3BP1在食管癌细胞中的功能及其与SGs的相关性奠定了基础。

GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1（G3BP1）；EC109细胞；细胞定位；应激颗粒（SGs）

GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1（Ras-GTase-activating protein SH3 domain binding pro⁃tein 1，G3BP1）是由Parker等通过免疫共沉淀分离到的第一个RasGAP SH3结构域结合蛋白[1]。G3BP1的相对分子质量为68 000，在进化过程中高度保守，属于RNA结合蛋白家族，在调控Ras信号转导过程中起重要作用[2]。哺乳动物细胞中至少存在2种形式的G3BP，即G3BP1和G3BP2。许多证据表明G3BP1具有多种生物学功能，参与细胞生长、转移、分化、凋亡和RNA代谢等过程。

研究表明G3BP1在多种肿瘤组织和细胞中高表达，包括头颈部癌、肺癌、结肠癌、肝癌、胃癌和乳腺癌等，而且与肿瘤的侵袭转移相关[3-6]，这暗示G3BP1可能是一种肿瘤标志物。……