韩聚强，杜静华，徐小洁，刘文鹏，梁吉光，，李佳睿，叶棋浓

1.陆军总医院 肝病科，北京 100700；2.河北医科大学第三医院 a.中西医结合肝病科；b.感染科；河北 石家庄 050051；3.军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100850；4.吉林大学第一医院 介入科，吉林 长春 130021

小鼠原代肝星状细胞的分离、鉴定及生物学功能分析

韩聚强1，3，杜静华2a，徐小洁3，刘文鹏2b，梁吉光4，3，李佳睿4，叶棋浓3

1.陆军总医院 肝病科，北京 100700；2.河北医科大学第三医院 a.中西医结合肝病科；b.感染科；河北 石家庄 050051；3.军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100850；4.吉林大学第一医院 介入科，吉林 长春 130021

目的：探索C57.BL/6J小鼠肝星状细胞（HSCs）分离、纯化的可行方案，并评价该法所得HSCs的生物学特性。方法：经肝门静脉，先用不含钙镁离子的D-Hanks液充分灌注肝脏，再以适宜浓度的链霉蛋白酶和Ⅳ型胶原酶顺序灌注，随后Percoll非连续密度梯度离心分离、纯化HSCs，台盼蓝拒染法检测HSCs活性，光镜观察体外培养的HSCs的形态学变化，免疫细胞化学鉴定α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和结蛋白的表达，Western印迹检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果：纯化后每只小鼠获得HSCs约5.5×105个，纯度及存活率均大于95%；免疫细胞化学技术证实培养的HSCs分别表达α-SMA和结蛋白；Western印迹显示原代HSCs体外培养7 d时，α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达量达到峰值。结论：建立的分离、纯化方案可获得高纯度、高活率、功能正常的小鼠原代HSCs，为进一步研究肝纤维化的发病机制提供了技术保障。

肝星状细胞；原代培养；细胞分离；小鼠

肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSCs）是引起肝纤维化的关键细胞，主要分布于肝脏窦周间隙（Disse间隙），是合成、分泌细胞外基质的重要来源[1-2]。……