杨亚东 丁 轲 张春杰 程相朝 贾艳艳 何 雷

(河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室/洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，洛阳 471023)

减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔsseK1Δasd宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究①

杨亚东 丁 轲 张春杰 程相朝 贾艳艳 何 雷

(河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室/洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，洛阳 471023)

目的为构建减毒鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株平衡致死系统，并将其开发为能够稳定携带外源基因的活疫苗载体。方法利用重组自杀性质粒(pREΔasd)介导的等位基因交换技术，以减毒鼠伤寒沙门菌株SL1344ΔsseK1为亲本株，运用二步法筛选asd基因缺失株SL1344ΔsseK1Δasd。将携带有asd基因的无抗性pYA3493质粒电转至上述缺失菌株SL1344ΔsseK1Δasd，构建SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)重组菌株。结果PCR及测序结果表明SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)构建成功。进一步研究表明重组菌株SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)血清型和强毒株SL1344及亲本株SL1344ΔsseK1相同，且能稳定遗传缺失后的asd基因；其生化特性和生长速度与强毒株SL1344及亲本株SL1344ΔsseK1相比均无明显差异。小鼠毒力试验表明，SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为5.24×108CFU，毒力较强毒株SL1344约下降至0.048%；免疫保护效力试验显示，运用鼠伤寒沙门菌野生毒株对免疫后第17天的小鼠攻毒有62.5%的保护率，与亲本株SL1344ΔsseK1基本一致。结论以上结果表明，鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株宿主-载体平衡致死系统构建成功，且遗传稳定，毒力明显降低，具有较好的免疫原性，为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服多价疫苗奠定基础。……