田 芳 罗伟光 郭旭丽 郭 靖 罗奇志 王慧鹏 邹义洲

(中南大学基础医学院医学免疫学系，长沙 410008)

·免疫学技术与方法·

抗主要组织相容性相关蛋白MICA/B的单克隆抗体制备及应用①

田 芳 罗伟光 郭旭丽 郭 靖 罗奇志 王慧鹏 邹义洲

(中南大学基础医学院医学免疫学系，长沙 410008)

目的制备抗主要组织相容性相关蛋白A/B(MICA/B)的单克隆抗体并对其特异性进行验证。方法以重组MICA*012蛋白免疫小鼠后将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合和筛选得杂交瘤细胞株，并用ELISA对其中9B10细胞株产生的单克隆抗体进行效价检测以及通过Western blot、Luminex、免疫荧光对其特异性进行检测。结果获得6株杂交瘤细胞株，其中9B10细胞株产生单克隆抗体(mAb)9B10的最低反应浓度为0.02 ng/μl,且mAb 9B10可应用于Western blot、Luminex和免疫组化荧光试验对MICA和MICB分子的检测。结论成功获得可同时检测MICA和MICB表达的单克隆抗体9B10。

MICA ；MICB；单克隆抗体；杂交瘤细胞

主要组织相容性相关蛋白A和B[Major histocompatibility complex(MHC)class Ⅰrelated chain A and B，MICA/B]是定位于人类第6号染色体短臂上的主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类相关基因A 和B编码的多态性细胞跨膜糖蛋白分子，主要由三个胞外区(α1，α2，α3)、一个跨膜区(TM)和一个胞质尾区构成[1，2]。MICA/B蛋白主要表达在上皮细胞、内皮细胞和成纤维细胞以及肿瘤细胞等细胞膜上[3-5]。 而部分细胞膜表面的MICA可在蛋白酶的作用下水解片段释放于细胞外液形成可溶性MICA(sMICA)，此外MICA还可呈颗粒型分泌到胞外[6，7]。这三种不同形式的MICA分子都没有抗原提呈作用，膜型MICA蛋白地与NK细胞上NKG2D受体结合后为效应细胞的活化提供活化信号，在抗感染、抗肿瘤、移植排斥及自身免疫等方面发挥效应[8]；……