廖德芳，苗海生，李华春，高 林，寇美玲，李 乐

（云南省畜牧兽医科学院，云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室，云南昆明 650224）

应用qRT-PCR方法快速定量蓝舌病抗原的研究

廖德芳，苗海生，李华春，高 林，寇美玲，李 乐

（云南省畜牧兽医科学院，云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室，云南昆明 650224）

在疫苗生产中需要对培养病毒的有效抗原数量进行定量，对其一般采用TCID50测定或噬斑滴定的方法。这些传统方法的缺点是耗时、重复性差异较大。本研究采用qRT-PCR检测蓝舌病病毒含量，并用准确滴定噬斑单位的蓝舌病病毒作为对照，比较待检样品和对照的Ct值，通过线性方程计算待检样品的病毒含量。对7个独立样品的检测结果表明，该方法的准确性和重复性均高于噬斑分析方法，并且可在蓝舌病病毒培养过程中实时检测病毒含量。该方法操作简单、快捷，可在病毒生产过程即时检测病毒含量，在蓝舌病疫苗生产中具有重要意义。

蓝舌病；qRT-PCR；病毒含量

Abstract：Quantitatively amount of cultivated virus in vaccine production was necessary，and the method of TCID50 or plaques titration to quantitative was adopted generally. The shortcomings of these traditional methods were timeconsuming and the repeatability was not strong. The Bluetongue virus content was detected by qRT-PCR，in contrast with accurate titration plaques units of Bluetongue virus as a control in this study. The Ct values of test and control samples were compared，and the concentrations of test samples by the linear equation was estimated. The test results of 7 independent samples showed that the accuracy and repeatability were higher than plaques analysis method. And this method could be applied to real-time detection virus content in the process of virus culture. The method was simple and rapid during the operation，and could detecte virus content in the process of virus culture，which had significance in Bluetongue vaccine production.

key words：Bluetongue；qRT-PCR；virus content

蓝舌病是世界动物卫生组织（OIE）须通报动物疫病，是一种主要由库蠓传播的虫媒病，能够感染多种偶蹄动物。疫苗免疫是控制该病的重要方法。在蓝舌病疫苗生产过程中，为了使疫苗生产标准化，需要对病毒含量进行准确定量，一般采用噬斑单位来表示病毒含量[1]。但是噬斑测定方法不仅费时，而且结果不稳定[2-4]。

实时荧光定量核酸扩增检测系统（qPCR）可对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，可以结合相应软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。……