罗强，刘军，周志华，李桀，刘英豪，朱玲，谭红，罗小成，杨杰，陈秋生

2010～2016年衡阳市职业高危人群禽流感感染及外环境禽流感病毒监测流行性分析

罗强，刘军，周志华，李桀，刘英豪，朱玲，谭红，罗小成，杨杰，陈秋生

（湖南省衡阳市疾病预防控制中心，湖南 衡阳 421001）

目的 了解衡阳市职业外环境禽流感病毒的分布情况，掌握职业暴露人群禽流感病毒感染状况及其流行病学规律。方法2010～2016年采集衡阳市职业暴露人群血清标本742份，应用红细胞血凝抑制试验法（H1）检测H5N1亚型流感病毒抗体。采集衡阳市家禽养殖地和农贸市场环境样本2 008份，采用荧光定量-PCR技术检测禽流感病毒（AIV）及分型。结果 2010～2016年共检测职业暴露人群血清标本742份，H5N1抗体检测阳性23份，阳性检出率3.10%，不同职业暴露人群血清检测阳性率总体差异无有统计学意义（χ2=1.84，P＞0.05）。2010～2016年检测外环境标本样2 008份，检出A型病毒阳性464份，阳性率23.11%，检出最多的为A型H9亚型流感病毒，占检出的病毒株53.66%（249/464）。2016年外环境标本阳性检出率为38.36%（145/378），高于其他年份，差异有统计学意义（χ2=105.6，P＜0.05）。第三季度外环境标本阳性检出率6.21%（18/290），明显低于其他季度，差异有统计学意义（χ2=56.31，P＜0.05）。禽类清洗污水44.64%（175/392），高于其他标本来源，差异有统计学意义（χ2=166.57，P＜0.05）。雁峰区外环境标本阳性检出率为35.32%（148/419），高于其他监测点，差异有统计学意义（χ2=64.32，P＜0.05）。结论 我市禽类外环境中存在禽流感病毒（AIV）并具有年度冬春季流行趋势，职业暴露人群中存在隐性感染者，应加强重点场所监测和宣传教育。

禽流感；职业暴露；环境监测

禽流感（avian influenza virus，AIV）是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的一种禽类感染征或病综合症。此病主要发生在家禽（鸡、火鸡等）和野禽（野鸭、野鹅等）等禽类，随着禽流感病毒的变异，有时也感染猪、马等低等哺乳动物，偶尔感染人。根据禽流感病毒对鸡致病性的不同，将禽流感病毒分为高致病性、中致病性和低/非致病性，高致病性的禽流感病毒以H5亚型病毒流行为主。目前，高致病性禽流感（H5N1）已被我国农业部已将其列为甲类监测传染病，也被国际上列为反生物恐怖内容之一[1]，而H7N9型流感虽基本不致禽类间发病，但可以感染人类，导致严重发病，甚至死亡。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2010～2016年选取衡阳市范围内的家禽养殖地和活禽交易市场的职业暴露人群。采用随机抽样方法，从禽类养殖户、农贸市场活禽销售人员以及家禽屠宰加工厂职业暴露人群中采集742份人群血清；并对其生活、居住、工作中接触的水样、禽类排泄物、笼具等表面采集2 008份外环境样本。

1.2 流行病学调查 用现场调查的方法，由专业人员对每位职业者进行面对面调查，用预先制定的流行病问卷调查，

内容主要包括基本信息、职业暴露方式、暴露时防护情况、病死禽接触史、流感样症状病史及流感疫苗接种史等。

1.3 标本采集及检测

1.3.1 血清标本采集 由当地乡镇卫生院或者社区服务中心安排护士对职业暴露人群进行血液标本采集，采集被调查者静脉血5 mL，静置分离血清，采集完成当天送衡阳市疾病预防控制中心检验科-20℃保存。

1.3.2 外环境标本采集 由疾控流调人员对职业人群周边环境进行采样，采集样本用螺旋病毒采样管保存，每次采集后的标本当天内送至衡阳市疾病预防控制中心检验科保存。

1.3.3 血清抗体检测 应用马红细胞血凝抑制试验法（H1）检测H5N1亚型流感病毒抗体。人血清对H5N1抗原的抑制效价≥1∶160可判断为阳性。灭活H5N1禽流感抗原、阳性对照血清均由国家流感中心（CNIC）提供，所有阳性标本结果通过生物安全转运，送湖南省疾病预防控制中心复核。

1.3.4 外环境标本检测价 应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测，采用荧光定量-PCR技术检测，经1%琼脂糖凝胶电泳，在210 bp出现特异性条带可判断为流感病毒A型阳性，然后进行H5、H7、H9亚型禽流感核酸检测引物进行分型。探针由CNIC提供，所有阳性标本结果通过生物安全转运，送湖南省疾病预防控制中心复核。

1.4 统计学方法 数据采用Epi-Data数据库双录入与校对，再将标本信息输入传染病监测平台信息管理系统，经CNIC反馈结果一致后，下载整理为Excel数据库，通过Epi-Info和Excel软件进行统计分析，采用χ2检验进行组间比较。

2 结果

2.1 一般情况 2010～2016年共调查职业暴露人群742人，其中男432人，女310人；年龄18～79岁，其中＜29岁113人，30～59岁381人，60～79岁248人。调查总户数352户，其中家禽规模养殖场有189户，占53.69%；家禽散养户有74户，占21.02%；野生候鸟栖息地居民47户，占13.35%，市场管理、运输销售和宰杀有42户，占11.93%。

2.2 不同年份职业暴露人群血清检测和外环境标本病毒采样结果 2010～2016年共检测血清标本742份，血清抗体检测阳性23份，阳性检出率3.10%。其中2010年检测血清标本200份，血清抗体检测阳性7份，阳性检出率3.50%；2011年检测血清标本80份，血清抗体检测阳性12份，阳性检出率15.00%；2012年检测血清标本40份，血清抗体检测阳性1份，阳性检出率2.50%；2014年检测血清标本131份，血清抗体检测阳性2份，阳性检出率1.53%；2016年检测血清标本50份，血清抗体检测阳性1份，阳性检出率2.00%，2013和2015年均未检测出血清标本阳性抗体。对不同年度之间血清抗体阳性检出进行卡方比较，总体差异有统计学意义（χ2=24.31，P＜0.05），表明不同年份间职业暴露人员感染病毒差异有统计学意义，2011年高于其他年份。见表1。

2010～2016年共采集外环境标本2 008份，检出A型病毒阳性464株，阳性检出率23.11%。2010年检测外环境样80份，检出A型病毒阳性15株，阳性率18.75%；2011年检测外环境样80份，检出A型病毒阳性7株，阳性率8.75%；2012年检测外环境样40份，检出A型病毒阳性3株，阳性率7.50%；2013年检测外环境样163份，检出A型病毒阳性51株，阳性率31.29%；2014年检测外环境样704份，检出A型病毒阳性99株，阳性率14.06%；2015年检测外环境样563份，检出A型病毒阳性144株，阳性率25.58%；2016年检测外环境样378份，检出A型病毒阳性145株，阳性率38.36%；对不同年度外环境采样检测阳性率总体差异有统计学意义（χ2=105.6，P＜0.05）。见表1。

表1 2010～2016年衡阳市职业暴露人群血清和环境标本监测结果Table 1 Detection results of out-environmental surveillance and serum antibody in people with occupational exposure in Hengyang,2010-2016

2.3 不同禽类接触方式置业人群血清抗体检测 对742名职业暴露人群志愿者，按从业类别接触禽类方式进行区分。其中家禽规模养殖户采集血清标本257份，血清抗体检测阳性11份，阳性检出率4.28%；家禽屠宰人员采集血清标本83份，血清抗体检测阳性2份，阳性检出率2.41%；散养户采集血清标本289份，血清抗体检测阳性7份，阳性检出率2.42%；活禽批发销售运输人员采集血清标本113份，血清抗体检测阳性3份，阳性检出率2.65%；对不同职业暴露人群血清检测阳性率总体差异无有统计学意义（χ2=1.84，P＞0.05）。所有人员最近1个月内未出现发热等流感样症状，最近1年中均无流感疫苗接种史。见表2。

表2 2010～2016年衡阳市不同职业暴露人群感染禽流感病毒血清检测结果Table 2 Detection results of serum toAIV among different occupational exposure population in Hengyang，2010-2016

2.3 2010～2016年衡阳市外环境阳性标本病毒分型结果2010～2016年共采集环境标本2 008份，检出A型病毒阳性464株。其中检出A（未分型）139株，占阳性标本29.96%；检出H5亚型72株，占阳性标本15.52%；检出H7亚型4株，占阳性标本0.86%；检出H9亚型249株，占阳性标本53.66%。见表3。

2.4 不同季节环境标本病毒采样结果 2010～2016年期间，汇总不同监测季度的检测结果。第一季度共检测外环境样640份，检出A型病毒阳性155份，阳性率24.22%；第二季度共检测外环境样548份，检出A型病毒阳性146份，阳性率26.64%；第三季度共检测外环境样290份，检出A型病毒阳性18份，阳性率6.21%；第四季度共检测外环境样530份，检出A型病毒阳性145份，阳性率27.36%；对不同季节外环境采样检测阳性率总体差异有统计学意义（χ2=56.31，P＜0.05）。见表4。

表3 2010～2016年衡阳市外环境阳性标本病毒分型结果Table3 Results of virus typing in positive samples of external environment in Hengyang,2010-2016

表4 2010～2016年不同检测季度衡阳市外环境标本监测采样结果Table 4 Detection of results in environmental samples collected in Hengyang during different seasons,2010-2016

2.5 不同外环境标本类型检测结果 2010～2016年期间，汇总不同标本来源的检测结果。其中外环境家禽粪便标本639份，检出A型病毒阳性71份，阳性率11.11%；外环境家禽笼具表面擦拭标本383份，检出A型病毒阳性65份，阳性率16.97%；外环境家禽饮水标本373份，检出A型病毒阳性89份，阳性率23.86%；外环境家禽清洗污水标本392份，检出A型病毒阳性175份，阳性率44.64%；外环境家禽砧板表面擦拭标本221份，检出A型病毒阳性64份，阳性率28.96%；对不同外环境标本来源采样检测阳性率总体差异有统计学意义（χ2=166.57，P＜0.05）。见表5。

表5 2010～2016年衡阳市不同环境标本检测采样结果Table 5 Detection of results in different environmental samples in Hengyang,2010-2016

2.6 不同县市区环境标本采样结果 2 008份外环境标本主要来源于4个监测点，雁峰区和珠晖区为城区，衡阳县和衡南县为周边县区，其中雁峰区共检测外环境样本419份，检出A型阳性病毒148株，阳性率35.32%；珠晖区共检测外环境样本621份，检出A型阳性病毒137株，阳性率22.06%；衡阳县共检测外环境样376份，检出A型阳性病毒96株，阳性率25.53%；衡南县共检测外环境样592份，检出A型阳性病毒83株，阳性率14.02%，不同县市区检测阳性率总体差异有统计学意义（χ2=64.32，P＜0.05）。见表6。

表6 2010～2016年衡阳市不同县市区环境采样标本结果Table 6 Environmental sampling test results in different urban areas in Hengyang,2010-2016

3 讨论

1997年5月中国香港报道首例人感染H5N1亚型禽流感病例，2003年11月我国大陆发生首例人感染H5N1亚型禽流感病例，2013年4月，我国发现全球首例人感染H7N9亚型禽流感病例。在全球范围内，禽流感病毒（AIV）的流行主要有H5、H6、H7、H9等亚型，其来源多样，家禽感染易暴发，人感染多呈散发。2009年国家不断扩大对外环境禽流感病毒监测和重点人群防控，2010年开始开展衡阳市禽流感职业高危人群和活禽市场环境的监测。2014年，衡阳市发生2例人感染高致病性H7N9禽流感确诊病例。

从衡阳市连续监测结果来看，外环境一直存在AIV流感病毒，呈多亚型共存，连续7年的检测数据显示，其中以H9亚型为主，A未分型、H5和H7共存的局面。从流行趋势来看，2013和2016年衡阳市外环境病毒阳性检出率是个高峰期，高于其他年份。与我国不同地区不同年份的外环境病毒阳性检出率有所不同[2-4]。针对连续7年的不同监测月份外环境AIV检测阳性率比较，在衡阳市主要以冬春二季为流行季节。通过当地的气象数据，在冬季中严寒时段缩短，冬春季节温差和湿度交替分界不明显，一直延伸到夏初，随着温度不断升高，湿度和雨水的不断增多，给AIV提供了很好的培养条件。本文认为，本市外环境中禽类流感病毒存在着流行波段，其可能受载体、大气温度和湿度及环境污染条件的影响。这也指示我们防控的重要时段和为监测禽流感病毒变化提供科学依据。

外环境标本来源不同的检测结果显示，不同标本来源的阳性AIV，禽类清洗污水和砧板表面擦拭的阳性检出率高于粪便、笼具表面拭子和禽类饮水。结合现场调查分析，当地规模化养殖一般是采取包山圈养5 000～20 000只不等，在山脚下搭建简易鸡舍，卫生环境、通风条件较差，污水排放多是通过挖一沟渠流入附近鱼塘及溪流。养殖从业人员居住地往往与鸡舍比邻而建，水源共用，厨房、寝室和厕所相距较近，易感染机率增大。本市城区病毒检出率高于县区，而城区病毒检出标本多来源于砧板表面，县区多来源于禽类清洗污水。特别是水源的污染，池塘水和排污沟渠水长期存在病毒的污染和储存，极易导致家禽和野禽的交叉感染，一旦毒株致病力增强，禽类和人类在无特异性抗体保护屏障下将导致发病。

本文结果显示，衡阳市对禽类职业暴露人群采集7年的742份血清中抗体阳性率为3.10%，与国内有些监测地区对职业暴露人群血清H5N1抗体检测阳性率有所不同[4-8]。活禽或活禽市场经营暴露一直被认为是病毒由禽类传播到人的主要危险因素，国内一些学者研究也证明禽类交易市场人员更高些[4-5，9]。本文调查显示，不同职业暴露者在从事禽类养殖、销售、屠宰和运输的从业过程中，感染的机会差异无统计学意义。现场调查职业现场暴露情况来看，养殖人员主要负责饲料配置、喂食、清扫、病死家禽处置，部分养殖场定期消毒记录缺失，存在未定期消毒的可能；由于养殖人员个人防护意识不强，口罩、手套、简易防护服均穿戴较少，与此同时，养殖人员多为长期居住在养殖场内，且居住卫生条件差，会导致感染机会增加。从另一方面，销售和运输人员，对贩卖运输车辆也很少消毒、并且还存在来路不明的禽类混杂输送，自我防范意识相对不强，也均导致其感染机会增加。相对其他暴露职业，由于近几年政府不断的宣传教育，加强对活禽市场的规范化管理，强化对活禽市场的监控，杜绝了病死家禽的隐形流通，提高了禽流感知识知晓率。因为从事该职业的人群普遍素质不高，个人防护意识不强，职业体检较少，往往因体质不同而感染发病。

职业暴露人群存在较多的隐形感染，在日常工作中极易造成禽流感病毒由禽到人的传播，但病毒感染后是否发病，存在着一定致病条件性或个体差异性。尽管Shi[10]等解释了H7N9病毒感染人类及HA蛋白226位并结合人类上呼吸道α-2，6唾液酶受体中起作用。Zhang[11]等解析了H5N1病毒与受体结合导致部分关键氨基酸位点的突变可以增强病毒在哺乳动物间的传播性。2010～2016年间，本市的监测场所一直未出现大批量的家禽死亡和禽流感病例出现，也没有直接证据证明禽流感病毒在不同宿主间相互传播致病。

从本市2例确诊的H7N9禽流感病例来看，通过国家、省、市三级疾控人员对所有密切接触者的调查监控，无新发病例和二代病例。从传播途径来看和外环境中监测情况看，人感染禽流感病毒（AIV）中H9亚型是通过中间媒介还是直接传播，到目前为止仍缺乏足够的证据。至于病毒感染人类，人是否传染人，能否导致发病的条件也尚未清楚。我市对外环境禽流感（AIV）病毒、职业暴露人群血清抗体和发病病例的监测将是一项持续长久有意义的工作。

致谢。感谢国家流感中心和湖南省疾病预防控制中心提供的技术支持。

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Epidemiological analysis on the high risk population and environment of avian influenza virus in Hengyang，2010-2016

Luo Qiang,Liu Jun,Zhou Zhi-hua,Li Jie,Liu Ying-hao,Zhu Ling,Tan Hong,Luo Xiao-cheng,Yang Jie,Chen Qiu-sheng
(Hengyang Center for Disease Control,Hengyang,Hunan,421001,China)

Objective To analyze the avian influenza virus status of external environment of professional in Hengyang,to master the virus infection and popular of the occupational exposure population.Methods 742 serum samples were collected from the population and influenza viruswas detected by erythrocyte hemagglutination inhibition assay.2 008 environment specimens from the poultry wholesale and farmers'markets were detected for Flu-A(AIV)by PCR,from 2010 to 2016 in Hengyang.Results 23 of 742 serum samples were positive for serum antibody detection from 2010 to 2016,with the positive rate of 3.10%.There was no significant difference in the positive rate of serum detection among different occupational exposure population(χ2=1.84,P＞0.05).464 of 2 008 environment specimens were positive for influenza A virus detection from 2010 to 2016,with the positive rate of 23.11%.H9(Flu-A)accounted for 53.66%(249/464).The detection rates in 2016(145/378)was higher than other years(χ2=105.6,P＜0.05).The detection rates in the third quarter 6.21%(18/290)was lower than that in other quarters(χ2=56.31,P＜0.05).The detection rates were high in environment specimens in water used for washing poultry 44.64%(175/392)(χ2=166.57,P＜0.05).District of Yanfen35.32%(148/419)were high other observation point(χ2=64.32,P＜0.05).Conclusions The circulation of avian influenza virus is active during winter-spring in Hengyang.There are recessive infections in occupational exposure populations.It is necessary to conduct target surveillance and health education among the people exposed.

Avian influenza;Occupational exposure;Environmental surveillance

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.28.002

2014年湖南省医药卫生科研项目（B2014-156）