郭燕君， 徐 营， 刘胜兵， 侯 杰， 叶先才， 王志坚， 沈忠飞

(嘉兴学院医学院， 浙江 嘉兴 314001)

LC3蛋白在小鼠卵泡颗粒细胞中的表达及定位研究*

郭燕君， 徐 营， 刘胜兵， 侯 杰， 叶先才， 王志坚， 沈忠飞△

(嘉兴学院医学院， 浙江 嘉兴 314001)

目的： 探讨自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3, LC3)在小鼠卵泡颗粒细胞中的表达及定位。方法: 昆明小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin，PMSG)前及注射后的第1、2、3、4、5天，采用免疫组织化学染色方法检测自噬相关蛋白LC3和凋亡相关蛋白cleaved caspase-3在卵泡中表达及共定位情况；促卵泡激素(follicle stimulating hormone，FSH)处理颗粒细胞后，Western blot检测LC3和cleaved caspase-3在颗粒细胞中的水平，免疫荧光方法对LC3在颗粒细胞中的亚细胞定位进行研究。结果: 在小鼠卵泡发育的各个阶段，LC3蛋白主要在颗粒细胞中表达；免疫荧光显示在闭锁卵泡的颗粒细胞中cleaved caspase-3和LC3的蛋白水平较高；在PMSG腹腔注射后第1、2天，颗粒细胞cleaved caspase-3和LC3-II的蛋白水平减少(P<0.05)；在PMSG腹腔注射后第3、4、5天，颗粒细胞的cleaved caspase-3和LC3-II蛋白水平依次增加； LC3-II和cleaved caspase-3的蛋白水平具有相关性(r2=0.8299，P<0.05)。FSH处理后，LC3-II定位于颗粒细胞胞浆并呈点状分布。结论: LC3主要在卵泡颗粒细胞中表达，其表达具有细胞特异性和区域特异性，提示自噬在卵泡发育过程中主要在颗粒细胞中发生。卵巢颗粒细胞自噬和凋亡具有相关性，均呈促性腺激素依赖性。

颗粒细胞； 轻链蛋白3； Cleaved caspase-3； 卵泡发育

在哺乳动物卵巢中，仅有一小部分的卵泡完全成熟并排卵，大多数的卵泡最终将闭锁和死亡。虽然卵泡闭锁的过程在卵巢周期中重复发生，但是大多数细胞死亡的确切机制还没有完全阐述清楚。有研究发现卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡相关[1]。但是，卵泡闭锁过程可能不是仅仅只有凋亡参与，已有研究显示在鹅和鹌鹑的窦状卵泡中观察到非凋亡形式的程序性细胞死亡(自噬和坏死样细胞死亡)现象[2-3]。

自噬是细胞内的降解系统，细胞内一部分胞质被一种具有双层膜结构的自噬体所包裹后，与溶酶体融合最终降解[4]。……