郭金波， 尹凤荣， 霍晓霞， 罗雨欣， 吴梦瑶， 张晓岚

(河北医科大学第二医院消化内科，河北省消化病重点实验室，河北省消化病研究所， 河北 石家庄 050000)

氯喹对体外活化肝星状细胞自噬与胶原代谢的影响

郭金波， 尹凤荣， 霍晓霞， 罗雨欣， 吴梦瑶， 张晓岚△

(河北医科大学第二医院消化内科，河北省消化病重点实验室，河北省消化病研究所， 河北 石家庄 050000)

目的： 研究不同浓度的自噬抑制剂氯喹(CQ)对活化的大鼠肝星状细胞系HSC-T6中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响及可能机制。方法: 应用转化生长因子β1(TGF-β1)活化HSC-T6细胞，给予CQ干预24 h。实验分组为：control组、TGF-β1组、TGF-β1+CQ (15 μmol/L)组、TGF-β1+CQ (30 μmol/L)组和TGF-β1+CQ (60 μmol/L)组。采用Western blot技术检测微管相关蛋白轻链3(LC3)比值LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ、自噬靶蛋白P62、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)和TIMP-2的表达情况；免疫细胞化学检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达；RT-qPCR检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-13、TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达变化。结果: CQ干预后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高且呈剂量依赖性；P62蛋白表达TGF-β1+CQ组均显著高于TGF-β1组(P<0.01)。TGF-β1组的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量较control组显著增加，TGF-β1+CQ组较TGF-β1组也有明显增加。α-SMA的表达在TGF-β1组和TGF-β1+CQ组均显著高于control组(P<0.05)，而TGF-β1组和TGF-β1+CQ各组之间无显著差异。MMP-13表达在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著下降(P<0.05)；TIMP-1和TIMP-2在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著升高(P<0.05)，且呈剂量依赖性。结论: 自噬抑制剂CQ能显著增加HSC-T6细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达并呈剂量依赖性，这可能与其上调TIMP-1及TIMP-2的表达并抑制MMP-13表达有关。

自噬； 氯喹； 肝星状细胞； Ⅰ型胶原； Ⅲ型胶原； 基质金属蛋白酶； 金属蛋白酶组织抑制物

肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)的主要病理特征是以胶原为主的细胞外间质(extracellular matrix, ECM)在肝组织内的过度合成和异常沉积。肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)是肝纤维化发生过程中产生ECM的主要细胞，HSCs活化是肝纤维化形成的细胞学基础，在肝纤维化发展过程中扮演重要角色[1]。自噬(autophagy) 通过降解细胞内蛋白质和亚细胞成分，实现细胞本身代谢需要和某些细胞器的更新[2]。目前国内外对自噬在肝纤维化中的研究主要侧重于其对肝星状细胞活化的影响，而自噬对活化后HSCs的生物学作用尚缺乏研究报道。……