欧阳婧孙园园唐泽民唐政山李放军杨寅柯

（1. 湖南大学生物学院，长沙 410082；2. 湖南省人民医院社会医学部，长沙 410002）

慢病毒介导沉默PD-L1基因在乳腺癌细胞中的表达

欧阳婧1孙园园1唐泽民1唐政山1李放军2杨寅柯1

（1. 湖南大学生物学院，长沙 410082；2. 湖南省人民医院社会医学部，长沙 410002）

构建含细胞程序性死亡因子配体1（PD-L1）基因的慢病毒载体三质粒体系，并检测其在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达情况。pMAGic 7.1慢病毒表达载体与质粒△8.91和pVSVG用聚乙烯亚胺（PEI）共转293T包装病毒，感染并筛选获得MDA-MB-231稳转细胞系，检测PD-L1表达情况。（1）MDA-MB-231在3种乳腺癌细胞中PD-L1表达量最高；（2）三质粒转染293T细胞48 h后荧光强度增强，达到90%以上；用病毒感染MDA-MB-231细胞，48 h获得20%左右荧光强度；（3）经筛选的MDA-MB-231稳转细胞系在mRNA水平和蛋白水平低表达PD-L1，其中由pMAGic-sh1包装的病毒干扰能力最强；（4）分别加入病毒后，干扰组细胞增殖能力下降，pMAGic-sh1干扰组细胞在加入病毒7 d后生长速度约为阴性对照的64.77%；（5）混合淋巴实验显示，sh-1干扰组的肿瘤抑制率为35.8%，是正常组的3.06倍，且干扰组的T淋巴细胞活性显著增强。成功通过PEI转染试剂建立了三质粒慢病毒包装体系，该体系获得的慢病毒可有效干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞中PD-L1的表达量，所得的干扰细胞株细胞增殖能力下降，可增强T细胞增殖活性及肿瘤细胞杀伤活性。

乳腺癌；细胞程序性死亡因子配体1基因；慢病毒载体；聚乙烯亚胺；共转染

乳腺癌是严重危害女性健康的主要恶性肿瘤，发病率占全身各种恶性肿瘤的7%-10%，几乎每8例女性中就有1例会罹患此病［1］。……