刘雁霞李少杰樊振川

（1. 天津科技大学大健康生物技术研究所 天津市大健康生物技术国际联合研究中心 天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457；2. 中国科学院微生物研究所 真菌学国家重点实验室，北京 100101）

粗糙脉孢菌ERG-11蛋白抗原的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备

刘雁霞1李少杰2樊振川1

（1. 天津科技大学大健康生物技术研究所 天津市大健康生物技术国际联合研究中心 天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457；2. 中国科学院微生物研究所 真菌学国家重点实验室，北京 100101）

构建pET-28a（+）-ERG-11重组质粒，表达6×His-ERG-11融合蛋白，制备ERG-11多克隆抗体。采用PCR技术扩增目的片段，插入pET-28a（+）原核表达载体，并转入E. coli BL21（DE3）感受态表达融合蛋白，融合蛋白经亲和纯化及分子筛纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，取血清后，采用间接ELISA法和Western blot法检测多克隆抗体的效价及特异性。成功构建了pET-28a（+）-ERG-11表达载体，SDS-PAGE电泳显示成功诱导出以包涵体形式存在的6 × His-ERG-11融合蛋白，两步纯化后得到纯度较高的抗原，间接ELISA法显示制备的多克隆抗体效价达到1∶512 000，Western blot显示具有较高特异性。成功实现了粗超脉孢菌ERG-11蛋白的原核表达，制备出一支兔抗粗超脉孢菌ERG-11的多克隆抗体。

粗超脉孢菌ERG-11基因；克隆；蛋白表达及纯化；多克隆抗体

近年来，随着抗生素的广泛应用，真菌感染的几率逐年增加，尤其存在于免疫力低下及免疫缺陷的人群中，如骨髓/器官移植者，人类免疫缺陷病毒（HIV）患者等［1］。目前随着一系列抗真菌药物的问世及人们的长期广泛使用，使得真菌的抗药性不断增强［2-5］，由真菌感染所导致的各种疾病以及高死亡率成为临床上亟待解决的重大问题。……