疟疾快速诊断试剂卡与镜检及乳酸脱氢酶检验结果比较观察

2017-09-13卢愈新覃丕恩潘茂华宋启灵苏泽强覃宇城邹春燕黄亚铭

中国医药科学 2017年16期

关键词：疟疾

卢愈新?覃丕恩?潘茂华?宋启灵?苏泽强?覃宇城?邹春燕?黄亚铭

[摘要] 目的分析以檢测疟原虫乳酸脱氢酶的疟疾快速检测试剂卡与疟原虫镜检及疟疾患者乳酸脱氢酶检测进行比较观察。方法对2015～2016年在加纳务工返乡人员以疟原虫镜检阳性住院治疗前的患者作为主要观察对象，同时进行快速疟原虫检测试剂卡检测（胶体金法）及患者乳酸脱氢酶检测，疟疾阳性患者按照四种疟原虫种类分组统计分析比较。结果疟疾观察患者共144例，其中镜检阳性患者共142例和2例临床症状明显血检阴性患者，镜检阳性率为98.61%（142/144）。恶性疟108例，间日疟、三日疟和卵形疟分别为9例、1例和24例。快速疟原虫检测试剂检测总体阳性率为95.14%（137/144），两种方法的统计学检验差异无统计学意义（P>0.05）。乳酸脱氢酶增高的患者占44.44%（64/144），与血检方法比较统计学检验差异有高度统计学意义（P<0.01）。结论该快速疟原虫检测试剂对疟原虫镜检技术掌握不熟练的医疗机构是一种较好的辅助检测试剂。而临床检验乳酸脱氢酶增高患者作为判断为疟疾患者存在较大的差异。

[关键词] 疟疾；镜检；疟疾快速诊断；乳酸脱氢酶

[中图分类号] R531.3 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）16-07-04

Comparison of the results of the rapid diagnostic kit for malaria with microscopic examination and detection of lactic dehydrogenase

LU Yuxin1 QIN Pi'en1 PAN Maohua1 SONG Qiling1 SU Zeqiang1 QIN Yucheng1 ZOU Chunyan2 HUANG Yaming3，4

1. Shanglin County Peoples Hospital of the Guangxi Zhuang Autonomous Region， Shanglin 530500， China； 2. The Guangxi Zhuang Autonomous Region Peoples Hospital， Nanning 530021， China； 3. The Guangxi Zhuang Autonomous Region Center for Disease Control and Prevention， Nanning 530028， China； 4. School of Life Science and Technology， Guangxi University， Nanning 530004， China

[Abstract] Objective To analyze the comparison of rapid malaria detection kit for detection of Plasmodium lactate dehydrogenase was used to detect lactate dehydrogenase in malaria patients and malaria parasites. Methods The migrant workers returned home to patients who had been hospitalized for malaria positive microscopy from Garnor during 2015 to 2016 were selected as the major observation object. At the same time， rapid detection of malaria parasites by reagent card test （colloidal gold method） and patient lactate dehydrogenase test were carried on. Malaria positive patients were grouped， analyzed and compared according to four species of plasmodium. Results A total of 144 malaria patients were observed， of whom 142 were positive and 2 were clinically negative. The positive rate of microscopy was 98.61%（142/144）. There were 108 cases of falciparum malaria， 9 cases of vivax malaria， three days malaria and 24 cases of oval malaria， 1 cases and two cases. The overall positive rate of rapid detection of Plasmodium parasites was 95.14%（137/144）， and the difference between the two methods was not statistically significant（P>0.05）. Lactic dehydrogenase increased in 44.44%（64/144）. Compared with blood test， the difference between the two methods was statistically significant（P<0.01）. Conclusion The rapid detection agent for Plasmodium falciparum is a better assistant detection reagent for the medical institutions with poor grasp of the microscopic examination technique of plasmodium. The clinical test shows that lactic dehydrogenase increased in patients with malaria as judged there was a big difference.endprint

[Key words] Malaria； Microscopy； Rapid diagnosis of malaria； Lactate dehydrogenase

广西上林县2013～2016年累计从非洲输入的疟疾患者共1582例，占广西输入性疟疾患者总数的85%，住院治疗共1007例，属于国内累计从非洲输入性疟疾病例数量最多且最集中的一个县[1-3]。特别是2013年6～7月出现短期大量从加纳返乡务工人员，入院治疗的疟疾患者急剧增加，曾经最多的一天达到18例疟疾患者，每年均有重症疟疾患者（脑型疟）入院进行抢救，给临床检验和住院治疗造成极大压力，为评价疟疾快速诊断试剂卡与疟疾镜检及乳酸脱氢酶之间的关系，在部分疟疾患者中进行了比较观察现报道如下。

1 材料与方法

1.1 观察对象

上林县2015～2016年在非洲加纳务工返乡人员因疟疾发病入院治疗患者作为观察对象，疟疾患者入院后治疗前，经显微镜镜检证实为疟原虫阳性患者，并做镜检疟原虫虫种分类。同时采用疟原虫快速检测试剂卡对血检疟原虫阳性患者血样做检测。患者血样检验科同时做乳酸脱氢酶检验。

1.2 疟原虫镜检

取临床诊断疟疾患者耳垂血或静脉血，用干净的载玻片制作成厚、薄血膜，待自然干燥后，用甲醇固定薄血膜后，采用3%～4%吉姆萨染液染色25～30min，用清水缓慢冲去染液，自然晾干后显微镜油镜头下镜检，对镜检疟疾阳性样品同时进行疟原虫分类，对厚血膜全部镜检完未发现疟原虫判断为阴性，对临床疟疾症状典型而血检阴性患者同樣做疟原虫快速检测试剂检测。

1.3 疟原虫快速检测试剂卡

试剂为广州万孚生物技术股份有限公司生产的疟原虫检测试剂（胶体金法），产品标准编号YZB/国4201-2011，2015年采购该试剂，有效期为24个月，均在有效期使用。该产品试剂条上主要包被有疟原虫的乳酸脱氢酶单克隆抗体。检测方法和结果判断均按照使用说明书进行。医院检验科对疟原虫镜检阳性血样同时采用疟原虫检测试剂卡进行检测。结果判断试剂卡对照C条显示为试剂正常，单独T1条显示为恶性疟原虫感染，单独T2条显示为间日疟原虫或三日疟及卵形疟原虫感染，T1和T1同时显示为恶性疟合并其它三种疟原虫任何一种或几种疟原虫感染。

1.4 乳酸脱氢酶检验

采用酶速率法进行检测，试剂为上海执诚生物科技有限公司生产的试剂盒（IFCC推荐方法（L→P）。此方法基于乳酸脱氢酶可以作用试剂中的乳酸和辅酶Ⅰ氧化型反应得到丙酮酸和辅酶Ⅰ还原型，故可以在340nm处测定辅酶Ⅰ还原型特定吸收的上升速率进而计算出样品中乳酸脱氢酶的活力。乳酸脱氢酶正常值110～240u/L

1.5 统计方法

患者血检疟原虫阳性及疟原虫快速检测试剂卡检测和乳酸脱氢酶检验阴阳性均样品按照疟原虫种种类进行统计分析，采用Excel 2003版软件对检测数据进行统计分析并制作统计表，同时对数据进行卡方检验统计处理。

2 结果

2.1 观察对象

疟疾患者共144例，全部来自上林县在非洲加纳务工返乡人员，返乡人员在国外务工期间反复疟疾发作并反复多次进行过抗疟药治疗。

2.2 疟原虫镜检阳性

144例疟疾中有142例血检阳性，总阳性率为98.61%（142/144）。患者中恶性疟占75%（108/144），间日疟占6.25%（9/144），三日疟占0.69%（1/144），卵形疟占 16.67%（24/144），其中2例患者临床症状典型而镜检为阴性占1.39%（2/144），见表1。

2.3 快速诊断试剂卡检测

镜检恶性疟阳性患者108例经快速诊断试剂卡检测结果，总的疟原虫检出阳性率为96.30%（104/108），单纯恶性疟患者为51例，恶性疟混合其它疟原虫感染为44例，合计为95例，阳性率为87.96%（95/108）。值得注意的是镜检4例阳性恶性疟患者经反复镜检为阳性但反复快速诊断试剂卡测试均为阴性，同样的问题在卵形疟的检测中也一样出现。对142例镜检阳性及2例镜检阴性但疟疾临床症状典型患者血样采用快速检测试剂卡检测总的阳性达到95.14%（137/144），镜检和快速诊断试剂卡检测的阳性率，两种方法的统计学检验差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.4 疟疾患者乳酸脱氢酶检验

镜检疟原虫阳性的144例疟疾患者同时进行乳酸脱氢酶检测结果显示，只有44.44%（64/144）疟疾患者存在乳酸脱氢酶增高，与血检方法比较统计学检验差异有高度统计学意义（P<0.01），见表1，因此，临床检验乳酸脱氢酶增高患者作为判断为疟疾患者存在较大的差异。

3 讨论

据世界卫生组织（WHO）《2015年世界疟疾报告》2015年全世界疟疾病例数和死亡病例数与2000年相比有明显的下降，但疟疾病例数仍然有2.14亿例，受疟疾威胁人群为32亿，疟疾死亡病例

数为43.8万人，有88%的疟疾病例和90%疟疾死亡病例均在非洲区域[4]。中国自2008年开始从非洲输入性疟疾患者逐年增多[5]，到2013年广西输入性疟疾患者疫情呈现爆发性增多[6]，输入性疟疾患者主要集中在上林县，直到目前该县仍然是广西输入性疟疾患者最多的地方，给当地的疟疾防治及入院治疗疟疾患者的及时诊断和早治疗带来巨大的挑战。国内在本世纪初就开始现场测试国外生产的疟疾快速诊断试剂产品[7-8]，所测试目标物质为疟原虫的蛋白和代谢过程所产生的酶，蛋白为富含组氨酸蛋白II（HRP II），酶为醛缩酶（ALD&ALS）和乳酸脱氢酶（pfLDH &panLDH）两种，这些疟原虫抗原用其制成单克隆抗体后包被在硝酸纤维膜上来检测疟疾患者血中的蛋白或酶[9]。目前国内报道现场使用的产品分为国内和国外两种产品，同时分有检测HRP II 和p-LDH检测试剂卡及pfLDH和panLDH试剂卡两种快速检测试剂卡，HRP II 抗原为疟原虫合成的一种水溶性蛋白，即使血液中虫体被清除后，该蛋白仍然会在血液中存在一段时间，据临床观察15d仍然检测为阳性[10]，而pLDH是疟原虫的一种循环抗原，仅有活性虫体产生，pLDH 的活性与疟原虫血症水平一致，在抗疟药治疗后2～4d，采用pLDH快速检测试剂卡检测结果为阴性[11]。本研究对镜检和快速检测试剂卡检测阳性患者同时检测了患者血液中的乳酸脱氢酶，初步的研究显示，乳酸脱氢酶增高的患者仅为44.44%，这或许与患者体内疟原虫密度高低有关以及患者其它疾病引起该酶的增高，作为判断为疟疾患者存在较大的差异。关于快速检测试剂卡检测142例镜检阳性患者中出现7例阴性患者也可能由于疟原虫密度过低相关。本次研究检测显示，疟疾患者采用镜检与快速诊断试剂卡两种方法比较统计学检验差异无统计学意义，该快速疟原虫检测试剂对疟原虫镜检技术掌握不熟练的医疗机构是一种较好的辅助检测试剂。国外与国内疟原虫快速检测试剂检测效果国内学者进行过现场比较研究，结果显示两者无差异[12-13]。采用疟疾快速诊断试剂盒对国内外疟疾患者的检测观察结果表明[14-15]，与疟原虫镜检相比该诊断试剂盒的优势是操作简单、无需任何仪器设备、检测所需时间短、检测结果判断容易，对疟原虫镜检技术掌握不熟练的医疗机构及基层医院是一种疟疾患者诊断较好的辅助检测试剂。endprint

[参考文献]

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